12209136001
Roche
TeloTAGGG™ Telomerlängen-Assay
sufficient for ≤50 reactions, kit of 1 (15 components), suitable for cell culture
Synonym(e):
Telomer
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About This Item
UNSPSC-Code:
41105500
Empfohlene Produkte
Verwendung
sufficient for ≤50 reactions
Qualitätsniveau
Verpackung
kit of 1 (15 components)
Hersteller/Markenname
Roche
Methode(n)
cell culture | mammalian: suitable
Lagertemp.
−20°C
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Allgemeine Beschreibung
Das Kit basiert auf der Southern-Analyse von terminalen Restriktionsfragmenten (TRF), die durch den Verdau der genomischen DNA mit häufig schneidenden Restriktionsenzymen erzeugt werden.
Schritt 1: Verdau der genomischen DNA
Die gereinigte genomische DNA wird durch eine optimierte Mischung von häufig schneidenden Restriktionsenzymen verdaut. Die Enzyme wurden so ausgewählt, dass die DNA der Telomere und Subtelomere nicht geschnitten wird. Dies beruht auf den speziellen Sequenzcharakteristika der Wiederholungen. Die nicht-telomere DNA wird in Fragmente mit niedrigem Molekulargewicht zerschnitten.
Schritt 2: Gelelektrophorese und Southern Blot
Nach dem Verdau der DNA werden die DNA-Fragmente mittels Gelelektrophorese aufgetrennt und anschließend durch Southern Blot auf eine Nylonmembran übertragen.
Schritt 3: Hybridisierung und Nachweis mit Chemilumineszenz
Die auf die Nylonmembran übertragenen DNA-Fragmente werden mit einer Digoxigenin(DIG)-markierten, für Telomerwiederholungen spezifischen Sonde hybridisiert und anschließend mit einem DIG-spezifischen Antikörper kovalent an alkalische Phosphatase gebunden. Schließlich wird die immobilisierte Telomersonde durch das hochsensitive Chemilumineszenz-Substrat für alkalische Phosphatase CDP-Star sichtbar gemacht. Die durchschnittliche TRF-Länge kann durch Vergleich der Signale mit einem Molekulargewichtsstandard ermittelt werden.
Schritt 1: Verdau der genomischen DNA
Die gereinigte genomische DNA wird durch eine optimierte Mischung von häufig schneidenden Restriktionsenzymen verdaut. Die Enzyme wurden so ausgewählt, dass die DNA der Telomere und Subtelomere nicht geschnitten wird. Dies beruht auf den speziellen Sequenzcharakteristika der Wiederholungen. Die nicht-telomere DNA wird in Fragmente mit niedrigem Molekulargewicht zerschnitten.
Schritt 2: Gelelektrophorese und Southern Blot
Nach dem Verdau der DNA werden die DNA-Fragmente mittels Gelelektrophorese aufgetrennt und anschließend durch Southern Blot auf eine Nylonmembran übertragen.
Schritt 3: Hybridisierung und Nachweis mit Chemilumineszenz
Die auf die Nylonmembran übertragenen DNA-Fragmente werden mit einer Digoxigenin(DIG)-markierten, für Telomerwiederholungen spezifischen Sonde hybridisiert und anschließend mit einem DIG-spezifischen Antikörper kovalent an alkalische Phosphatase gebunden. Schließlich wird die immobilisierte Telomersonde durch das hochsensitive Chemilumineszenz-Substrat für alkalische Phosphatase CDP-Star sichtbar gemacht. Die durchschnittliche TRF-Länge kann durch Vergleich der Signale mit einem Molekulargewichtsstandard ermittelt werden.
Telomere sind spezialisierte DNA-Protein-Strukturen, die sich am Ende von eukaryotischen Chromosomen befinden. Sie bestehen aus kleinen, tandemartig wiederholten DNA-Sequenzen. Zahlreiche Telomersequenzen wurden identifiziert, die nur sehr geringe Sequenzvariationen aufweisen, sogar zwischen phylogenetisch verschiedenen Organismen wie Tetrahymena (Sequenz: TTGGGG) und Menschen (Sequenz: TTAGGG).
Weil die DNA-Polymerase die Enden von linearer DNA nicht replizieren kann, wurde vermutet, dass die Chromosomenenden mit jedem Replikationszyklus zunehmend kürzer werden (das sogenannte „Endreplikationsproblem”). Dieses Phänomenon, das sowohl in vitro als auch in vivo nachgewiesen wurde, scheint mit der begrenzten Zellteilungskapazität von normalen Körperzellen (“molekulare Uhr”) in Zusammenhang zu stehen. Da Keimbahnzellen, Stammzellen und Tumorzellen eine verlängerte oder sogar unendliche Lebensdauer aufweisen, wurde vermutet, dass diese Zellen wahrscheinlich über einen speziellen Mechanismus zur Erhaltung der Telomerlänge verfügen.
Die Erhaltung einer stabilen Telomerlänge ist mit der Aktivierung der Telomerase assoziiert. Dieses Enzym ist ein Ribonukleoprotein, das den Verlust der Telomer-DNA durch das Anfügen von wiederholten DNA-Sequenzen an den Chromosomenenden ausgleicht und dabei seine intrinsische RNA-Komponente als Matrize für die DNA-Synthese verwendet.
Telomere spielen eine entscheidende Rolle für die Erhaltung der Stabilität der eukaryotischen Chromosomen in einer Zelle durch spezifische Bindung an Strukturproteine. Diese Proteine bedecken die Enden von linearen Chromosomen und verhindern dadurch nukleolytischen Abbau, Fusion der Chromosomenenden, unregelmäßige Rekombination und andere Ereignisse, die für die Zelle normalerweise tödlich wären.
Die Analyse der Telomerlänge von humanen mononukleären Zellen aus peripherem Blut in Proben für wissenschaftliche Untersuchungen ergab, dass die Telomerlänge mit zunehmendem Alter des Spenders abnimmt, was die Vorgeschichte der Replikation in diesen Zellen widerspiegelt. Bei verschiedenen Syndromen und Krankheiten (z. B. Down-Syndrom, Louis-Bar-Syndrom und HIV-Infektion) wurde ein beschleunigter Telomerverlust beschrieben, was auf einen Zusammenhang zwischen der reduzierten Telomerlänge und den mit diesen Syndromen und Krankheiten assoziierten Immunstörungen hinweist. Dieses Kit wurde für die Erweiterung der wissenschaftlichen Kenntnisse über diese Zusammenhänge konzipiert.
Testzeit: etwa 18 Stunden
Probenmaterial: Zellkulturen und sonstige biologische Proben
Nichtradioaktiver Chemilumineszenz-Assay zur Bestimmung der Telomerlänge.
Weil die DNA-Polymerase die Enden von linearer DNA nicht replizieren kann, wurde vermutet, dass die Chromosomenenden mit jedem Replikationszyklus zunehmend kürzer werden (das sogenannte „Endreplikationsproblem”). Dieses Phänomenon, das sowohl in vitro als auch in vivo nachgewiesen wurde, scheint mit der begrenzten Zellteilungskapazität von normalen Körperzellen (“molekulare Uhr”) in Zusammenhang zu stehen. Da Keimbahnzellen, Stammzellen und Tumorzellen eine verlängerte oder sogar unendliche Lebensdauer aufweisen, wurde vermutet, dass diese Zellen wahrscheinlich über einen speziellen Mechanismus zur Erhaltung der Telomerlänge verfügen.
Die Erhaltung einer stabilen Telomerlänge ist mit der Aktivierung der Telomerase assoziiert. Dieses Enzym ist ein Ribonukleoprotein, das den Verlust der Telomer-DNA durch das Anfügen von wiederholten DNA-Sequenzen an den Chromosomenenden ausgleicht und dabei seine intrinsische RNA-Komponente als Matrize für die DNA-Synthese verwendet.
Telomere spielen eine entscheidende Rolle für die Erhaltung der Stabilität der eukaryotischen Chromosomen in einer Zelle durch spezifische Bindung an Strukturproteine. Diese Proteine bedecken die Enden von linearen Chromosomen und verhindern dadurch nukleolytischen Abbau, Fusion der Chromosomenenden, unregelmäßige Rekombination und andere Ereignisse, die für die Zelle normalerweise tödlich wären.
Die Analyse der Telomerlänge von humanen mononukleären Zellen aus peripherem Blut in Proben für wissenschaftliche Untersuchungen ergab, dass die Telomerlänge mit zunehmendem Alter des Spenders abnimmt, was die Vorgeschichte der Replikation in diesen Zellen widerspiegelt. Bei verschiedenen Syndromen und Krankheiten (z. B. Down-Syndrom, Louis-Bar-Syndrom und HIV-Infektion) wurde ein beschleunigter Telomerverlust beschrieben, was auf einen Zusammenhang zwischen der reduzierten Telomerlänge und den mit diesen Syndromen und Krankheiten assoziierten Immunstörungen hinweist. Dieses Kit wurde für die Erweiterung der wissenschaftlichen Kenntnisse über diese Zusammenhänge konzipiert.
Testzeit: etwa 18 Stunden
Probenmaterial: Zellkulturen und sonstige biologische Proben
Nichtradioaktiver Chemilumineszenz-Assay zur Bestimmung der Telomerlänge.
Anwendung
Der TeloTAGGG™ Telomerlängen-Assay wurde für die Verwendung in folgenden Life-Science-Forschungsanwendungen entwickelt:
- Sensitiver Nachweis von Telomer-DNA (Telomersequenz: TTAGGG) in Zellkulturen und sonstigen Proben für die biologische Forschung
- Bestimmung der Telomerlängen von DNA in Zellkulturen und sonstigen Proben für die biologische Forschung
Leistungsmerkmale und Vorteile
- Sicher: Nicht radioaktiv
- Flexibel: Weist Telomere aus einer Vielzahl von Organismen nach, einschließlich Menschen und Mäuse
Verpackung
1 Kit mit 15 Komponenten.
Sequenz
Bei Sequenz und Länge der Sonde handelt es sich um vertrauliche Informationen. Der DIG-markierte Molekulargewichtsmarker (MW) in dem Kit ist ein Gemisch aus DIG MW III und VII.
Angaben zur Herstellung
Arbeitskonzentration: Die Arbeitskonzentration eines Konjugats hängt von der Anwendung und dem Substrat ab
Die folgenden Konzentrationen sollten als Leitfaden erachtet werden:
Arbeitslösung: TAE-Puffer
0,04 M Tris-Acetat, 0,001 M EDTA, pH 8,0
HCl-Lösung
0,25 M HCl
Für einen 200-cm2-Blot werden ungefähr 250 ml Lösung benötigt.
Denaturierungs- lösung
0,5 M NaOH, 1,5 M NaCl
Für einen 200-cm2-Blot werden ungefähr 500 ml Lösung benötigt.
Neutralisierungslösung
0,5 M Tris-HCl, 3 M NaCl, pH 7,5
Für einen 200-cm2-Blot werden ungefähr 500 ml Lösung benötigt.
20x SSC
3 M NaCl, 0,3 M Natriumcitrat, pH 7,0
2x SSC
20x SSC (Lösung 5) 1:10 mit autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser verdünnen.
DIG Easy Hyb Granulat
Das Granulat (Flasche 8) mit 64 ml autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser rekonstituieren und bei 37 °C bis zur vollständigen Rekonstituierung inkubieren. Die Lösung mehrere Stunden vor Gebrauch herstellen.
Stringenter Waschpuffer I
2x SSC, 0,1% SDS
Stringenter Waschpuffer II
0,2x SSC, 0,1 % SDS
Waschpuffer, 1x
Ein geeignetes Volumen Waschpuffer, 10x (Flasche 10) 1:10 mit autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser verdünnen.
Blockierungslösung, 1x
Ein geeignetes Volumen Blockierungspuffer, 10x (Flasche 12) 1:10 mit Maleinsäurepuffer, 1x (Lösung 12) verdünnen.
Maleinsäurepuffer, 1×
Ein geeignetes Volumen Maleinsäurepuffer, 10x (Flasche 11) 1:10 mit autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser verdünnen.
Anti-DIG-AP, Arbeitslösung
Zur Reduktion des Hintergrunds durch aggregierte Antikörper das Fläschchen vor Gebrauch 5 min bei 13.000 U/min zentrifugieren.
Ein geeignetes Volumen Anti-DIG-AP (Flasche 13) mit Blockierungslösung, 1x (Lösung 11) auf eine Endkonzentration von 75 mU/ml (1:10.000) verdünnen.
Detektionspuffer, 1x
Ein geeignetes Volumen Detektionspuffer, 10x (Flasche 14) 1:10 mit autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser verdünnen.
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): TAE-Puffer:
Haltbar bei 15 bis 25 °C
HCl-Lösung
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Denaturierungs- lösung
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Neutralisierungslösung
Haltbar bei 15 bis 25 °C
20x SSC
Haltbar bei 15 bis 25 °C
2x SSC
Haltbar bei 15 bis 25 °C
DIG Easy Hyb
Haltbar bei 15 bis 25 °C für 3 Monate
Stringenter Waschpuffer I
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Stringenter Waschpuffer II
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Waschpuffer, 1x
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Blockierungslösung, 1x
Unmittelbar vor Gebrauch herstellen. Nicht lagern
Maleinsäurepuffer, 1×
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Anti-DIG-AP, Arbeitslösung
Unmittelbar vor Gebrauch herstellen. Nicht lagern
Detektionspuffer, 1x
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Die folgenden Konzentrationen sollten als Leitfaden erachtet werden:
- Dot Blot: 100 ng/ml
- ELISA: 100 ng/ml
- Western Blot: 100 ng/ml
Arbeitslösung: TAE-Puffer
0,04 M Tris-Acetat, 0,001 M EDTA, pH 8,0
HCl-Lösung
0,25 M HCl
Für einen 200-cm2-Blot werden ungefähr 250 ml Lösung benötigt.
Denaturierungs- lösung
0,5 M NaOH, 1,5 M NaCl
Für einen 200-cm2-Blot werden ungefähr 500 ml Lösung benötigt.
Neutralisierungslösung
0,5 M Tris-HCl, 3 M NaCl, pH 7,5
Für einen 200-cm2-Blot werden ungefähr 500 ml Lösung benötigt.
20x SSC
3 M NaCl, 0,3 M Natriumcitrat, pH 7,0
2x SSC
20x SSC (Lösung 5) 1:10 mit autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser verdünnen.
DIG Easy Hyb Granulat
Das Granulat (Flasche 8) mit 64 ml autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser rekonstituieren und bei 37 °C bis zur vollständigen Rekonstituierung inkubieren. Die Lösung mehrere Stunden vor Gebrauch herstellen.
Stringenter Waschpuffer I
2x SSC, 0,1% SDS
Stringenter Waschpuffer II
0,2x SSC, 0,1 % SDS
Waschpuffer, 1x
Ein geeignetes Volumen Waschpuffer, 10x (Flasche 10) 1:10 mit autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser verdünnen.
Blockierungslösung, 1x
Ein geeignetes Volumen Blockierungspuffer, 10x (Flasche 12) 1:10 mit Maleinsäurepuffer, 1x (Lösung 12) verdünnen.
Maleinsäurepuffer, 1×
Ein geeignetes Volumen Maleinsäurepuffer, 10x (Flasche 11) 1:10 mit autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser verdünnen.
Anti-DIG-AP, Arbeitslösung
Zur Reduktion des Hintergrunds durch aggregierte Antikörper das Fläschchen vor Gebrauch 5 min bei 13.000 U/min zentrifugieren.
Ein geeignetes Volumen Anti-DIG-AP (Flasche 13) mit Blockierungslösung, 1x (Lösung 11) auf eine Endkonzentration von 75 mU/ml (1:10.000) verdünnen.
Detektionspuffer, 1x
Ein geeignetes Volumen Detektionspuffer, 10x (Flasche 14) 1:10 mit autoklaviertem, nochmals destilliertem Wasser verdünnen.
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): TAE-Puffer:
Haltbar bei 15 bis 25 °C
HCl-Lösung
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Denaturierungs- lösung
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Neutralisierungslösung
Haltbar bei 15 bis 25 °C
20x SSC
Haltbar bei 15 bis 25 °C
2x SSC
Haltbar bei 15 bis 25 °C
DIG Easy Hyb
Haltbar bei 15 bis 25 °C für 3 Monate
Stringenter Waschpuffer I
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Stringenter Waschpuffer II
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Waschpuffer, 1x
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Blockierungslösung, 1x
Unmittelbar vor Gebrauch herstellen. Nicht lagern
Maleinsäurepuffer, 1×
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Anti-DIG-AP, Arbeitslösung
Unmittelbar vor Gebrauch herstellen. Nicht lagern
Detektionspuffer, 1x
Haltbar bei 15 bis 25 °C
Sonstige Hinweise
Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.
Rechtliche Hinweise
Hergestellt in Lizenz von Geron Corporation.
TeloTAGGG is a trademark of Roche
Nur Kit-Komponenten
Produkt-Nr.
Beschreibung
- Hinf I (30μl) 40U/μl
- Rsa I (30μl) 40U/μl
- Digestion Buffer 10x concentrated
- Water, nuclease-free
- Control DNA 150μl
- DIG Molecular Weight Marker 40 μl
- Loading Buffer 5x concentrated
- DIG Easy Hyb Granules
- Telomerase Probe
- Washing Buffer 10x concentrated
- Maleic Acid Buffer 10x concentrated
- Blocking Buffer 10x concentrated
- Anti-DIG-AP antibody
- Detection Buffer 10x concentrated
- Substrate Solution (CDP-Star) ready-to-use
Alle anzeigen (15)
Signalwort
Warning
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Eye Irrit. 2 - Skin Irrit. 2
Lagerklassenschlüssel
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 3
Flammpunkt (°F)
does not flash
Flammpunkt (°C)
does not flash
Analysenzertifikate (COA)
Suchen Sie nach Analysenzertifikate (COA), indem Sie die Lot-/Chargennummer des Produkts eingeben. Lot- und Chargennummern sind auf dem Produktetikett hinter den Wörtern ‘Lot’ oder ‘Batch’ (Lot oder Charge) zu finden.
Besitzen Sie dieses Produkt bereits?
In der Dokumentenbibliothek finden Sie die Dokumentation zu den Produkten, die Sie kürzlich erworben haben.
G Yang et al.
Oncogene, 26(10), 1492-1498 (2006-09-06)
The risk of developing ovarian cancer is about 1% over a lifetime, but it is the most deadly gynecologic cancer, in part due to lack of diagnostic markers for early-stage disease and cell model system for studying early neoplastic changes.
Matthew Parker et al.
Genome biology, 13(12), R113-R113 (2012-12-13)
Telomeres are the protective arrays of tandem TTAGGG sequence and associated proteins at the termini of chromosomes. Telomeres shorten at each cell division due to the end-replication problem and are maintained above a critical threshold in malignant cancer cells to
Anna Aulinas et al.
PloS one, 10(3), e0120185-e0120185 (2015-03-24)
Cushing's syndrome (CS) increases cardiovascular risk (CVR) and adipocytokine imbalance, associated with an increased inflammatory state. Telomere length (TL) shortening is a novel CVR marker, associated with inflammation biomarkers. We hypothesized that inflammatory state and higher CVR in CS might
Jinghua Yuan et al.
The journals of gerontology. Series A, Biological sciences and medical sciences, 73(8), 1027-1035 (2018-01-24)
Environmentally persistent organic pollutant (POP) is the general term for refractory organic compounds that show long-range atmospheric transport, environmental persistence, and bioaccumulation. It has been reported that the accumulation of POPs could lead to cellular DNA damage and adverse effects
Li-Ying Sung et al.
Cell reports, 9(5), 1603-1609 (2014-12-04)
Haplo-insufficiency of telomerase genes in humans leads to telomere syndromes such as dyskeratosis congenital and idiopathic pulmonary fibrosis. Generation of pluripotent stem cells from telomerase haplo-insufficient donor cells would provide unique opportunities toward the realization of patient-specific stem cell therapies.
Unser Team von Wissenschaftlern verfügt über Erfahrung in allen Forschungsbereichen einschließlich Life Science, Materialwissenschaften, chemischer Synthese, Chromatographie, Analytik und vielen mehr..
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