SCR508

TAT-CRE-Recombinase

TAT-CRE Recombinase is a recombinant cell-permeant fusion cre-recombinase protein consisting of TAT sequence, a nuclear localization sequence (NLS) and it is known to catalyze the site specific recombination event between two loxP DNA sites.

• Synonym(e): Integrase, Recombinase Cre
• UNSPSC-Code: 12352204
• eCl@ss: 32160405
• NACRES: NA.75

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Escherichia coli
• Qualitätsniveau: 100
• Rekombinant: expressed in E. coli
• Assay: >70% (SDS-PAGE)
• Form: liquid
• Methode(n): cell culture | stem cell: suitable
• Versandbedingung: dry ice

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die Cre-Rekombinase ist ein Enzym aus dem Bakteriophagen P1, das gezielt die Rekombination zwischen zwei DNA-Erkennungsstellen katalysiert, die als loxP-Stellen bezeichnet werden. Die loxP-Erkennungsstellen bestehen aus zwei 13 bp invertierten Wiederholungen, die eine 8 bp Spacer-Sequenz flankieren. Da das Cre-Gen und die loxP-Stellen nicht nativ im Genom der meisten Arten vorkommen, können loxP-Stellen modifiziert und in Zielzellen eingebracht und so als Mittel eingesetzt werden, um die Genexpression in vitro (d. h. in kultivierten Zellen) und in vivo (d. h. in Tiermodellen) genau steuern zu können.

• Wenn loxP-Stellen sich auf verschiedenen Chromosomen befinden, bewirkt die Cre-Rekombinase eine Chromosomentranslokation.
• Wenn loxP-Stellen in entgegengesetzter Richtung orientiert sind, bewirkt die Cre-Rekombinase eine Inversion des gefloxten Segments.
• Wenn loxP-Stellen in gleicher Richtung orientiert sind, schneidet die Cre-Rekombinase das gefloxte Segment heraus.

Auf diese Weise ermöglicht die Platzierung der loxP-Stellen die Aktivierung oder Repression von Genen oder den Austausch gegen andere Gene.

Die TAT-CRE Recombinase von EMD Millipore ist ein rekombinantes, zellpenetriendes Fusionsprotein, das aus einem basischen, von HIV-TAT (TAT) stammenden Proteintranslokationspeptid, einer nuklearen Lokalisationssequenz (NLS), dem Cre-Protein und einem N-terminalen Histidin-Tag (H6) zur wirksamen Proteinaufreinigung von E. coli besteht.

Die TAT-CRE Recombinase von EMD Millipore exzidiert nachweislich wirksam virale STEMCCA-Transgene von iPS-Zellen von Menschen oder Mäusen.

Anwendung

EMD Millipore hat ein zellpenetriendes TAT-CRE-Recombinase-Fusionsprotein entwickelt, das direkt in Säuretierzellen eingebracht wird und einen hohen Rekombinationswirkungsgrad erreicht (75 – 100 % bei Mauszellen, ca. 60 % bei menschlichen Zellen). TAT-CRE transloziert leicht in Säugetierzellen und kann Rekombinationen sehr effizient katalysieren. Die Dosis und zeitliche Terminierung der Cre-Exposition kann präzise gesteuert werden und ermöglicht so das sorgfältige Titrieren von Cre-Aktivität.

Qualität

Jede Charge des TAT-CRE-Rekombinase-Proteins wird im Rahmen einer strengen Qualitätskontrolle auf folgende Parameter geprüft:

• Reinheit: einzelne Bande um 41 kDa mit mehr als 70 % Proteinreinheit auf einem SDS-PAGE-Gel
• Funktionelle Aktivität: vermittelt die Rekombination von LoxP-modifizierten Allelen in einer HEK293T-Cre-Reporter-Zelllinie
• Endotoxingehalt: weniger als 1 EU/ug Protein

Einheitendefinition

Ein Standard von 100 Einheiten ist als die Menge von TAT-CRE (ug) in 1,0 mL eines Gewebekulturmediums definiert, die erforderlich ist, um eine 50%ige GFP-Expression in einem Assay einer HEK293T-loxp-Reporter-Zelllinie herbeizuführen.

Physikalische Form

Rekombinantes Protein wird in Puffer geliefert, der 50 % Glycerin (v/v), 500 mM NaCl und 20 mM HEPES bei pH-Wert 7,4 enthält.

Lagerung und Haltbarkeit

Bei Lagerung bei -20°C oder -80°C ab Empfangsdatum 3 Monate haltbar. Nach dem ersten Auftauen das Fläschchen zentrifugieren und die Lösung vorsichtig mischen. In Aliquote aufteilen und bei -20°C oder -80°C einfrieren. Vor dem Gebrauch TAT-CRE mit Kulturmedium auf die geeignete Konzentration verdünnen und durch einen gering proteinbindenden Spritzenvorsatzfilter filtrieren (Millipore Kat.-Nr. SLGV 033RS oder SLGV013 SL).

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 1