12156792910

In Situ Cell Death Detection Kit, TMR rot

sufficient for ≤50 tests

• Synonym(e): rot, tm, in situ Cell Death Detection Kit, tm rot, in situ Cell Death Detection Kit
• UNSPSC-Code: 12352200

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for ≤50 tests
• Qualitätsniveau: 100
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): flow cytometry: suitable
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Breit angewandte Methoden zur Apoptosebestimmung beinhalten die Analyse der genomischen DNA durch Agarose-Gelelektrophorese sowie DNA-Fragmentierungsassays, basierend auf 3H-Thymidin oder auf 5-Brom-2′-desoxyuridin. Diese Methoden bestehen darin, dass in einer gegebenen Zellpopulation die fragmentierten DNA, die ein geringeres Molekulargewicht aufweisen, von den nicht fragmentierten DNA, deren Molekulargewicht höher ist, getrennt werden. Somit liefern diese Methoden keine Informationen darüber, was mit einer Einzelzelle innerhalb einer Population oder insbesondere in Gewebeschnitten geschieht. Alternativ können einzelne apoptotische Zellen - aufgrund des charakteristischen Erscheinungsbildes der Chromatinkondensierung und -fragmentierung in ihren Kernen - mikroskopisch festgestellt werden. Diese Methode ist allerdings subjektiv und kann nur innerhalb eines relativ kurzen Zeitraums genutzt werden, wenn die morphologischen Veränderungen ihren Höhepunkt erreichen.
Die Apoptose ist durch den DNA-Abbau gekennzeichnet, der in Frühstadien selektiv an den internukleosomalen DNA-Linker-Regionen stattfindet. Aus der DNA-Spaltung können Doppel- und Einzelstrangbrüche (Nicks) entstehen. Beide Arten von Brüchen können durch die Markierung der freien 3′-OH-Termini mit modifizierten Nukleotiden (z.B. Biotin-dUTP, DIG-dUTP, Fluorescein-dUTP) in einer enzymatischen Reaktion nachgewiesen werden. Das Enzym Terminale Desoxynukleotidyltransferase (TdT) katalysiert die Template-unabhängige Polymerisation von Desoxyribonukleotiden an das 3′-Ende der einzel- oder doppelsträngigen DNA. Diese Methode wird auch als TUNEL-Methode (TdT-mediated dUTP-X nick end labeling) bezeichnet. Alternativ können freie 3′-OH-Gruppen durch DNA-Polymerasen im Zuge eines Template-abhängigen Mechanismus, der sog. Nick-Translation, markiert werden. Die TUNEL-Methode gilt allerdings als die genauere und schnellere Methode.

Probenmaterial: Zellsuspensionen, Zytospin und Präparate von Zellabstrichen, an Objektträgern gewachsene adhärente Zellen sowie eingefrorene und in Paraffin eingebettete Gewebeschnitte.

Prinzip
Das In Situ Cell Death Detection-Kit (TMR rot) basiert auf der Erkennung von Einzel- und Doppelstrang-DNA-Brüchen, die im Frühstadium der Apoptose entstehen.
Apoptotische Zellen werden fixiert und permeabilisiert. Anschließend werden die Zellen mit Hilfe des TdT und TMR-dUTP enthaltenden TUNEL-Reaktionsgemischs inkubiert. Während dieser Inkubationszeit katalysiert die TdT die Addition von TMR-dUTP an freie 3′-OH-Gruppen in den einzel- und doppelsträngigen DNAs. Nach dem Waschen wird der an den beschädigten Stellen der DNA befindliche Marker mittels Durchflusszytometrie und/oder Fluoreszenzmikroskopie visualisiert.

Kit zur Erkennung und Quantifizierung des apoptotischen Zelltods auf der Ebene von einzelnen Zellen durch Durchflusszytometrie und Fluoreszenzmikroskopie sowie zur Doppelmarkierung mit Fluorescein-markierten Zellmarkern (TMR rot).

Spezifität

Mit der TUNEL-Reaktion werden vor allem DNA-Strangbrüche markiert, die während der Apoptose erzeugt werden. Dies ermöglicht die Unterscheidung zwischen Apoptose und Nekrose sowie primären DNA-Strangbrüchen, die durch Zytostatika oder Bestrahlung induziert wurden.

Anwendung

Im In Situ Cell Death Detection-Kit wird TMR-Rot im terminalen Desoxynukleotidyltransferase-Biotin-dUTP Nick-Endmarkierungs (TUNEL)-Assay verwendet. Es wird im Apoptose-Nachweisverfahren verwendet.

Präzise, schnelle und einfache Technik für Nachweis und Quantifizierung apoptotischer DNA-Fragmentierung auf Einzelzellebene in Zellen und Geweben mit einer roten Fluoreszenzmarkierung für die Fluoreszenzmikroskopie und Durchflusszytometrie.

Verpackung

1 Kit mit 2 Komponenten.

Angaben zur Herstellung

Arbeitskonzentration: Enzymkonzentration
Die optimale Enzymkonzentration liegt zwischen 0,5 und 5 U pro Assay. Für eine Standard 50 μl PCR empfehlen wir die Verwendung von 2 U des Enzymgemischs.
Arbeitslösung: Das Gesamtvolumen (50 μl) der Enzymlösung zu den verbleibenden 450 μl der Markierungslösung hinzufügen; dies ergibt 500 μl TUNEL-Reaktionsgemisch.
Gut mischen, um die Komponenten zu äquilibrieren.
Lagerungsbedingungen (Arbeitslösung): Das TUNEL-Reaktionsgemisch unmittelbar vor Gebrauch herstellen und nicht lagern. TUNEL-Reaktionsgemisch bis zum Gebrauch auf Eis legen.

Das TUNEL-Reaktionsgemisch wird durch das Mischen von Enzymlösung und Markierungslösung vor Gebrauch hergestellt.

Sonstige Hinweise

Gewinner des CiteAb Award 2024 in der Kategorie „Supplier Succeeding in Parkinson′s Research“ (Erfolgreiche Anbieter in der Parkinson-Forschung)

Nur Kit-Komponenten

• Enzyme Solution (TdT)
• Label Solution (TMR-dUTP)

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08,GHS09
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H350i,H411
• P-Sätze: P201 - P273 - P280 - P308 + P313 - P391 - P501
• Gefahreneinstufungen: Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
• Lagerklassenschlüssel: 6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash