HTS112M

ChemiScreen rekombinantes humanes Glucagon-Rezeptor-Membranpräparat

Human glucagon / GCG GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPγS binding.

• Synonym(e): ChemiSCREEN Receptor Kit, Glucagon Receptor Membrane Prep, Human Glucagon Receptor Prep
• UNSPSC-Code: 41106514
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.84

Eigenschaften

• Biologische Quelle: human
• Qualitätsniveau: 100
• Rekombinant: expressed in Chem-1 cells
• Hersteller/Markenname: ChemiScreen; Chemicon^®
• Methode(n): ligand binding assay: suitable (GTPγS); radioligand binding assay (RLBA): suitable
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NM_000160.2
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P47871
• Versandbedingung: dry ice

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

TRANSFEKTION: Vollständige humane GCGR-cDNA, Glucagon-Rezeptor kodierend
WIRTSZELLEN: Chem-1, eine adhärente Zelllinie in Säugetieren ohne endogene Glucagon-Rezeptor-Expression.

Glucagon ist ein Peptidhormon mit 29 Aminosäuren, das die Glykogenolyse und Glykogensynthese in der Leber zur Erhöhung des Glukosespiegels im Blut stimuliert. Der Rezeptor für Glucagon ist ein GPCR der Klasse 2 (oder Klasse B), der zur Stimulierung der cAMP-Produktion via G_s signalisiert (Mayo et al., 2003). Mäuse, denen der Glucagonrezeptor fehlt, haben leichte Hypoglykämie nach dem Fasten und weisen eine Hyperplasie der pankreatischen α-Zellen auf (Gelling et al., 2003). Der Glucagonrezeptor stellt aufgrund seiner Hyperglykämie-fördernden Rolle ein potenzielles Ziel für die Behandlung von Diabetes dar. Die Glucagonrezeptor-Membranpräparate von Chemi-Con sind Rohmembranpräparate, die aus unseren firmeneigenen, stabilen rekombinanten Zelllinien hergestellt werden, um eine hohe GPCR-Oberflächenexpression sicherzustellen. Deshalb sind sie ideale HTS-Tools für das Screening auf Antagonisten der Wechselwirkungen des Glucagonrezeptors und seiner Liganden. Die Membranpräparationen weisen einen Kd-Wert von 3,09 nM für [¹²⁵L]-Glucagon auf. Mit 1 nM [¹²⁵L]-Glucagon ergeben 5 oder 10 μg/Well des Glucagonrezeptor-Membranpräparats ein Signal-Hintergrund-Verhältnis von 10:1 oder mehr.

Qualität

SPEZIFIKATIONEN:
1 Einheit = 5 μg
B_max für die Bindung von [¹²⁵L] Glucagon: 16,7 pmol/mg Protein
K_d für die Bindung von [¹²⁵L] Glucagon: ~ 3,09 nM

Signal: Werte für den Hintergrund und die spezifische Bindung in einem kompetitiven Bindungstest mit verschiedenen Mengen des Glucagonrezeptor-Membranpräparats:

	10 µg/Well	5 µg/Well
Signal: Hintergrund	10,1	35
Spezifische Bindung (cpm)	33315	36252

Spezifikationen

Inkubationsbedingungen
EMPFOHLENE TESTBEDINGUNGEN: Die Membranen werden mit einem radioaktiven Liganden und einem unmarkierten Kompetitor im Bindungspuffer auf einer nicht bindenden 96-Well-Platte gemischt und 1–2 Stunden lang inkubiert. Vor der Filtration wird eine GF/C 96-Well-Filterplatte 30 min lang mit 0,33 % Polyethylenimin beschichtet und danach mit 50 mM HEPES, pH 7,4, 0,5 % BSA gewaschen. Die Bindungsreaktion wird auf die Filterplatte überführt und 3x je 1 mL pro Well pro Waschvorgang mit Waschpuffer gewaschen. Die Platte wird danach getrocknet und ausgezählt.
• Bindungspuffer: 50 mM HEPES, pH 7,4, 5 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 0,2 % BSA, filtriert und bei 4 °C
aufbewahrt • Radioligand: [¹²⁵L]-Glucagon (Perkin-Elmer-Nr.: NEX-207)
• Waschpuffer: 50 mM HEPES, pH 7,4, 500 mM NaCl, 0,1 % BSA, filtriert und bei 4 °C aufbewahrt.

Eine Packung enthält ausreichend Membranen für mindestens 200 Tests (Einheiten), wobei eine Einheit die Membranmenge ist, die mit [¹²⁵L]-markiertem Glucagon bei 1 nM ein Signal-Hintergrund-Verhältnis von mehr als 10:1 ergibt.

Physikalische Form

Flüssigkeit in Verpackungspuffer: 50 mM Tris pH 7,4, 10 % Glycerin und 1 % BSA; ohne Konservierungsstoffe.
Verpackungsmethode: Die Membranproteine wurden auf 0,5 mg/mL in 1 mL Verpackungspuffer eingestellt, schnell eingefroren und bei -80 °C gelagert.

Rechtliche Hinweise

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 2
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable