ABN249

Anti-HNE-Michael-Addukte-Antikörper, reduziert

serum, from rabbit

• Synonym(e): Reduced 4-hydroxy-trans-2-nonenal Michael adducts, Reduced HNE Michael adducts
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rabbit
• Qualitätsniveau: 100
• Antikörperform: serum
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: polyclonal
• Speziesreaktivität: bovine, human
• Methode(n): western blot: suitable
• Versandbedingung: ambient
• Posttranslationale Modifikation Target: unmodified

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Bei der Lipidperoxidation erzeugte, reaktive Aldehyde tragen zu mit oxidativem Stress verbundenen Zell- und Gewebeschäden bei. Alpha,beta-ungesättigte Carbonylverbindungen, wie 4-Hydroxy-2-nonenal (HNE), 4-Oxo-2-nonenal (ONE) und Acrolein, die bei der Oxidation von mehrfach ungesättigten Fettsäuren (Polyunsaturated Fatty Acids, PUFA) entstehen, interagieren bereitwillig mit nukleophilen Gruppen an Proteinen, was zu einer intra- oder intermolekularen Proteinvernetzung führt. Es gibt zwei HNE-Modifizierungstypen. Der erste Typ wird durch eine Reaktion zwischen Michael-Addukt und Lysin-Amin, Histin-Imidazol oder Cystein-Sulfhydryl im Verhältnis 1:1 gebildet und der zweite Typ entsteht durch die gleichzeitige Reaktion zwischen einem HNE und zwei freien Aminogruppen aus zwei N-alpha-Acetyllysinen (NAL), der sogenannten Schiff′schen Base mit Michael-Addukt. Beim zweiten Typ wird die anfangs nicht fluoreszierende Verbindung aus Lysin-HNE und Schiff′scher Base mit Michael-Addukt im Verhältnis 2:1 einer oxidativen Zyklisierung unterzogen, um ein fluoreszierendes 2-Hydroxy-3-imino-1,2-Dihydropyrrol-Derivat zu bilden, das häufig als HNE-Fluorophor bezeichnet wird. Das reversibel gebildete HNE-Lys-Michael-Addukt ist nicht stabil und es wird häufig eine Reduktion mittels Natriumborhydrid (NaBH4) eingesetzt, um die Lys-HNE-Modifizierung in Proteinproben zu erhalten. Die reduktive Stabilisierung durch die Behandlung mit NaBH4 wird auch eingesetzt, um den Verlust von 4-HNE aus dem 4-HNE-Cys-Michael-Addukt durch eine Retro-Michael-Addition-Reaktion (RMA) bei der kollisionsinduzierten Dissoziation (Collision-Induced Dissociation, CID) und MS/MS mit Elektronentransfer-Dissoziation (ETD) zu verhindern.

Spezifität

Die Zielmodifizierung ist nicht speziesspezifisch.

Dieses polyklonale Antiserum detektierte HNE-modifiziertes BSA erst nach aber nicht vor der Reduktion mittels Natriumborhydrid.

Immunogen

Mit HNE modifiziertes KLH, das mittels Natriumborhydrid chemisch reduziert wurde.

Anwendung

Anti-HNE-Michael-Addukte-Antikörper, reduziert, Best.-Nr. ABN249, ist ein hochspezifischer polyklonaler Kaninchenantikörper, der auf die reduzierte Form von 4-Hydroxy-2-noneal-Michael-Addukten gerichtet ist und in Western Blots getestet wurde.

Anwendungshinweise:
1. ABN249 ersetzt Calbiochem 393207. Es ist davon auszugehen, dass in der Immunzytochemie und Immunhistochemie angemessene Leistungen mit ABN249 erzielt werden. Bitte nutzen Sie die folgenden Zitate zu 393207 als Beispiele für die Probenvorbereitung und den Nachweis bei diesen beiden Anwendungsarten:

Usatyuk, P.V., et al. (2006). J. Biol. Chem. 281(46):35554–35566 (Immunzytochemie).
McCormack, A.L., et al. (2005). J. Neurochem. 93(4):103–1037 (Immunhistochemie).

2. Anti-HNE-Fluorophor, Best.-Nr. 393206, ist auch zum Nachweis von HNE-Fluorophor mittels ELISA, Immunhistochemie und Western Blotting verfügbar.

3. Zum Erstellen einer Positivkontrolle für Western Blots behandeln Sie 2 mg/ml BSA-Lösung in 10 mM KH2PO4, pH-Wert 7,4, mit 0,1 bis 0,5 mM HNE und inkubieren Sie dies anschließend 1 Stunde bei 37 °C. Sie können die Reaktion anhand der HNE-Extinktion bei 224 nm (Extinktionskoeffizient 13,750/M) überwachen. Freies HNE kann nach der chemischen Reaktion mittels Gelfiltration und Dialyse entfernt werden.

HNE-Michael-Addukte in Proteinlösung müssen vor der Analyse mit ABN1348 mittels Natriumborhydrid (NaBH4) chemisch reduziert werden. Geben Sie eine frisch präparierte 100-mM-NaBH4-Lösung in 1 mM NaOH im Verhältnis 1:9 (V:V) zur Proteinprobenlösung, um eine NaBH4-Endkonzentration von 10 mM zu erhalten. Lassen Sie die Proteinlösung 10 bis 30 Minuten lang bei Raumtemperatur ruhen, bevor Sie sie durch Zugabe von 5 bis 10 Moläquivalenten Aceton abschrecken.

Qualität

Beurteilt mittels Western Blot in reduziertem HNE-BSA.

Western-Blot-Analyse: Mit einer Verdünnung dieses Antikörpers im Verhältnis 1:10.000 wurden 10 ng HNE-modifiziertes BSA erst nach aber nicht vor der Reduktion mittels Natriumborhydrid nachgewiesen.

Zielbeschreibung

Ja nach Größe des/der HNE-modifizierten Proteins/e variabel. Nicht charakterisierte Banden können in manchen Lysaten beobachtet werden.

Verlinkung

Ersetzt: Calbiochem 393207

Hinweis zur Analyse

Kontrolle
Mit HNE modifiziertes BSA, das mittels Natriumborhydrid chemisch reduziert wurde.

Sonstige Hinweise

Konzentration: Die Konzentration entnehmen Sie bitte dem chargenspezifischen Datenblatt.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable