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Benzonase^® Nuclease HC

Purity > 99%, Effective Viscosity Reduction and Removal of Nucleic Acids from protein solutions

• Synonym(e): Endonuclease aus Serratia marcescens
• CAS-Nummer: 9025-65-4
• EC-Nummer: 3.1.30.2 (BRENDA, IUBMB)
• MDL-Nummer: MFCD00131010
• UNSPSC-Code: 12352202
• NACRES: NA.54

Eigenschaften

• product name: Benzonase^® Nuklease HC, Reinheit > 99 %, Effective Viscosity Reduction and Removal of Nucleic Acids from protein solutions
• Biologische Quelle: Serratia marcescens
• Qualitätsniveau: 100
• Rekombinant: expressed in E. coli
• Assay: >99% (SDS-PAGE)
• Form: buffered aqueous glycerol solution
• Hersteller/Markenname: Novagen^®
• Lagerbedingungen: OK to freeze
• Konzentration: ≥250 units/μL
• Verunreinigungen: <0.25 EU/kU Total endotoxin
• Anwendung(en): research use
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Benzonase^® Nuklease ist eine gentechnisch veränderte Endonuklease aus Serratia marcescens. Sie baut alle DNA- und RNA-Formen (einzelsträngig, doppelsträngig, linear und zirkulär) ohne proteolytische Aktivität ab. Sie ist über ein breites Spektrum von Bedingungen wirksam und weist eine außerordentlich hohe spezifische Aktivität auf. Das Enzym dient dem kompletten Verdau von Nukleinsäuren in 5′-Monophosphat-terminierte Oligonukleotide mit einer Länge von 2 bis 5 Basen (unterhalb der Hybridisierungsgrenze). Dies ist ideal für die Entfernung von Nukleinsäuren aus rekombinanten Proteinen und ermöglicht die Einhaltung der FDA-Richtlinien für Nukleinsäurekontamination. Aufgrund ihrer Fähigkeit, Nukleinsäuren rasch zu hydrolysieren, ist Benzonase eine ausgezeichnete Wahl zur Reduzierung von Viskosität, Verkürzung der Verarbeitungsdauer und Erhöhung der Proteinausbeute. Das Enzym ist beispielsweise mit BugBuster und PopCulture Proteinextraktionsreagenzien kompatibel und kann daher zusammen mit diesen Reagenzien zugegeben werden, um bei E. coli-Extrakten Viskosität zu eliminieren und Nukleinsäuren zu entfernen.

Das Enzym besteht aus zwei Untereinheiten von je 30 kDa. Es ist zwischen pH 6 und 10 und von 0–42 °C funktionsfähig und erfordert 1–2 mM Mg²⁺ zur Aktivierung. Das Enzym ist auch in Gegenwart von ionischen und nicht-ionischen Detergenzien, Reduktionsmitteln, PMSF (1 mmol/l), EDTA (1 mmol/l) und Harnstoff aktiv (die relative Aktivität hängt von den spezifischen Bedingungen ab). Die Aktivität wird durch >150 mmol/l monovalente Kationen, >100 mmol/l Phosphat, >100 mmol/l Ammoniumsulfat oder >>100 mmol/l Guanidin-HCl gehemmt.

Benzonase-Nuklease ist in den Qualitätsstufen reinst (>>99 % mittels SDS-PAGE) und rein (>>90 %) in einer Standardkonzentration von 25–29 E/µl und in einer hohen Konzentration (HC) von 250 E/µµl erhältlich. Beide Zubereitungen sind frei von nachweisbaren Proteasen und weisen eine spezifische Aktivität von > 1 × 10⁶ E/mg Protein auf. Der >99%ige Reinheitsgrad wird auf Endotoxine getestet und enthält <0.25 EU/1000 units. The product is suppliedas a 0.2 µm filtered solution in 50% glycerol.Store at -20°C.

Total endotoxin:<0.25 EU/1,000 units.Purity: >99 % durch SDS-PAGE.

Anwendung

Entfernung von Nukleinsäure in Proteinproben

Biochem./physiol. Wirkung

Verdaut native oder hitzedenaturierte DNA und RNA.

Warnhinweis

Toxizität: Standard-Handhabung (A)

Einheitendefinition

Eine Einheit ist definiert als die Menge an Enzym, die einen ΔA₂₆₀ von 1,0 in 30 Minuten bewirkt, was einem vollständigen Verdau von 37 µg DNA entspricht.

Rechtliche Hinweise

Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 2