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Purinergic signaling mediated by P2X7 receptors controls myelination in sciatic nerves.

Journal of neuroscience research (2014-06-07)
A Faroni, R J P Smith, P Procacci, L F Castelnovo, E Puccianti, A J Reid, V Magnaghi, A Verkhratsky
RÉSUMÉ

Adenosine-5'-triphosphate, the physiological ligand of P2X receptors, is an important factor in peripheral nerve development. P2X7 receptor is expressed in Schwann cells (SCs), but the specific effects of P2X7 purinergic signaling on peripheral nerve development, myelination, and function are largely unknown. In this study, sciatic nerves from P2X7 knockout mice were analyzed for altered expression of myelin-associated proteins and for alterations in nerve morphology. Immunohistochemical analyses revealed that, in the wild-type peripheral nerves, the P2X7 receptor was localized mainly in myelinating SCs, with only a few immunopositive nonmyelinating SCs. Complete absence of P2X7 receptor protein was confirmed in the sciatic nerves of the knockout mice by Western blot and immunohistochemistry. Western blot analysis revealed that expression levels of the myelin proteins protein zero and myelin-associated glycoprotein are reduced in P2X7 knockout nerves. In accordance with the molecular results, transmission electron microscopy analyses revealed that P2X7 knockout nerves possess significantly more unmyelinated axons, contained in a higher number of Remak bundles. The myelinating/nonmyelinating SC ratio was also decreased in knockout mice, and we found a significantly increased number of irregular fibers compared with control nerves. Nevertheless, the myelin thickness in the knockout was unaltered, suggesting a stronger role for P2X7 in determining SC maturation than in myelin formation. In conclusion, we present morphological and molecular evidence of the importance of P2X7 signaling in peripheral nerve maturation and in determining SC commitment to a myelinating phenotype.

MATÉRIAUX
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Sigma-Aldrich
HEPES, ≥99.5% (titration)
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Sigma-Aldrich
HEPES, BioPerformance Certified, ≥99.5% (titration), suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
DAPI, for nucleic acid staining
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium solution, for molecular biology, 1.00 M±0.01 M
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, anhydrous, ≥98%
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Sigma-Aldrich
Acrylamide, suitable for electrophoresis, ≥99%
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Sigma-Aldrich
HEPES, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (T)
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Sigma-Aldrich
Osmium tetroxide, ReagentPlus®, 99.8%
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Sigma-Aldrich
HEPES solution, 1 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Acrylamide, for molecular biology, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Osmium tetroxide solution, 4 wt. % in H2O
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, powder, <200 μm
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SAFC
HEPES
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium solution, BioUltra, for molecular biology, 2 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Acrylamide, suitable for electrophoresis, ≥99% (HPLC), powder
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Sigma-Aldrich
Osmium tetroxide solution, suitable for electron microscopy, 4% in H2O
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Sigma-Aldrich
Acrylamide solution, 40%, suitable for electrophoresis, sterile-filtered
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, BioReagent, suitable for insect cell culture, ≥97.0%
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Sigma-Aldrich
Osmium tetroxide solution, 2.5 wt. % in tert-butanol
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Sigma-Aldrich
HEPES, BioXtra, suitable for mouse embryo cell culture, ≥99.5% (titration)
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SAFC
HEPES
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Sigma-Aldrich
Anticorps anti-protéine basique de la myéline, acides aminés 82 à 87, culture supernatant, clone 12, Chemicon®
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Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium solution, PCR Reagent, 25 mM MgCI2 solution for PCR
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Sigma-Aldrich
Osmium tetroxide, ACS reagent, ≥98.0%
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Prix
Quantité
Sigma-Aldrich
Osmium tetroxide solution, suitable for electron microscopy, 2% in H2O
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Quantité
Sigma-Aldrich
Chlorure de magnésium, AnhydroBeads, −10 mesh, 99.9% trace metals basis
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Quantité
Sigma-Aldrich
HEPES, BioXtra, pH 5.0-6.5 (1 M in H2O), ≥99.5% (titration)
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Sigma-Aldrich
Anticorps de chèvre anti-IgG de rat, conjugué à de la HRP, Chemicon®, from goat
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Sigma-Aldrich
Os EnCat® 40, extent of labeling: 0.3 mmol/g Os loading
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