COLLA-RO

Collagénase A

from Clostridium histolyticum

• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Code UNSPSC : 12352204

Propriétés

• Source biologique: Clostridium histolyticum
• Niveau de qualité: 100
• Stérilité: non-sterile
• Forme: lyophilized
• Activité spécifique: >0.15 U/mg lyophilizate (Collagenase activity)
• Conditionnement: pkg of 100 mg (10103578001); pkg of 2.5 g (11088793001); pkg of 500 mg (10103586001)
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Concentration: 1 mg/mL (0.1%, w/v)
• Couleur: brown
• pH optimal: 6.0-8.0
• Solubilité: water: soluble
• Adéquation: suitable for PCR
• Numéro d'accès NCBI: WP_138210331
• Numéro d'accès UniProt: A0A4U9RG91
• Application(s): cell analysis; life science and biopharma; sample preparation
• Activité étrangère: Clostripain 9.489 U/mg; Proteases 6.067 U/mg (Azocoll ); Trypsin 0.144 U/mg (with BAEE)
• Température de stockage: 2-8°C
• Informations sur le gène: Clostridium histolyticum ... COLA_1(1668506084)

Description

Description générale

La collagénase est une protéase qui clive la protéine en triple hélice appelée collagène. Clostridium histolyticum produit six types de collagénases : α, β, γ, δ, ε et λ. Ces collagénases sont actives contre le tissu conjonctif et sont plus réactives vis-à-vis de la gélatine que du collagène. La collagénase issue de Clostridium histolyticum est particulièrement réactive, car elle digère le collagène par ses deux extrémités à des températures aussi basses que 4-10 °C.

Spécificité

La collagénase dégrade le collagène natif. La clostripaïne, les enzymes du type trypsine et les protéases neutres dégradent également d'autres protéines.
Activité enzymatique :
Activité collagénase : >0,15 U/mg (selon Wünsch) (à +25 °C, substrat : 4-phényl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)
Activités d'enzymes contaminantes : activité trypsine, clostripaïne et protéase neutre.
La collagénase A présente un ratio équilibré d'activités enzymatiques.

Application

La collagénase de C. histolyticum est largement utilisée dans les applications suivantes :

• désagrégation de nombreux types de tissus (poumon, cœur, muscle, os, tissu adipeux, foie, rein, cartilage, glande mammaire, placenta, vaisseaux sanguins, cerveau, tumeurs, cordon ombilical par exemple).
• préparation de suspensions unicellulaires destinées à la mise en place de systèmes de culture de cellules primaires. Il est recommandé d'utiliser la collagénase A lorsque le rendement, la viabilité et la fonctionnalité revêtent un caractère critique.
• préparation de cellules de nombreux types de tissus différents, notamment des hépatocytes, des adipocytes, des ilôts de Langerhans, des cellules épithéliales, des cellules musculaires, des cellules endothéliales, etc. Il convient néanmoins de déterminer empiriquement la capacité de chaque lot de l'enzyme à s'attaquer à un tissu particulier.

Définition de l'unité

Contenu
Lyophilisat, non stérile

Définition de l'unité : La collagénase de Roche est dosée en unités Wünsch (1 μmol de produit formé par minute à +25 °C avec du substrat Wünsch).
L'activité de la collagénase est fréquemment indiquée en unités Mandl (1 μmol de leucine libérée par du collagène en 5 heures à +37 °C).
Malheureusement, il n'existe aucun facteur de conversion cohérent entre les deux unités d'activité, car l'unité Mandl dépend en partie de la concentration en protéases contaminantes dans la préparation de collagénase, variable impossible à définir. Comparativement à une préparation brute, une préparation de collagénase pure donnerait une activité spécifique en unités Mandl plus faible. Les préparations de Clostridium donnent habituellement des facteurs de conversion d′environ 1/1800 (par exemple, un lot particulier de collagénase de Clostridium contenait environ 0,15 U Wünsch/mg et 250 U Mandl/mg).

Notes préparatoires

Activateur : Ca²⁺
Inhibiteurs :
Inhibiteurs de la collagénase : EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoéthanol
La collagénase n'est pas inhibée par le sérum.
Inhibiteurs de la clostripaïne : TLCK
Inhibiteurs de la trypsine : aprotinine, inhibiteur de trypsine (blanc d'œuf, soja), sérum
Concentration de travail : 0,5 à 2,5 mg/ml
Conditions de stockage (solution de travail) : -15 à -25 °C
Roche recommande de ne reconstituer que la quantité de lyophilisat nécessaire à une utilisation immédiate. La solution reconstituée peut être conservée jusqu'à une semaine entre -15 et -25 °C. Éviter les congélations et décongélations répétées, car l'activité diminue après reconstitution.

Reconstitution

Reconstitution dans n'importe quelle solution saline équilibrée (HBSS par exemple).

Stockage et stabilité

Conserver le récipient bien fermé dans un endroit sec et bien ventilé.

Autres remarques

Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Les conditions d'expédition peuvent varier

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS07,GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H315 - H319 - H334 - H335
• Conseils de prudence: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Classification des risques: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organes cibles: Respiratory system
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash