11636090910
Roche
Kit de synthèse de sondes de PCR DIG
sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)
Synonyme(s) :
sonde, système DIG
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About This Item
Code UNSPSC :
41105500
Produits recommandés
Utilisation
sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)
Niveau de qualité
Fabricant/nom de marque
Roche
Technique(s)
PCR: suitable
Température de stockage
−20°C
Description générale
Ce kit de synthèse de sondes de PCR DIG contient une formulation de digoxigénine-11-désoxyuridine-triphosphate (DIG-11dUTP) labile en milieu basique. Ce kit permet de produire, de manière simple et efficace, des sondes d'ADN marquées à la digoxigénine qui sont hautement sensibles en PCR. Les sondes sont marquées au DIG-11dUTP (labile en milieu basique) par la technique de PCR. Le rapport DIG-dUTP:dTTP est de 1:2.
Ce kit de synthèse de sondes de PCR DIG contient le mélange d'ADN polymérases Expand High Fidelity. Cet excellent mélange d'enzymes à activité correctrice polymérise les sondes de 40 pb à 5 kb de long avec 10 pg d'ADN plasmidique ou 10 ng d'ADN génomique comme matrice. Les sondes marquées à la digoxigénine sont stables pendant plus d'un an.
Ce kit de synthèse de sondes de PCR DIG contient le mélange d'ADN polymérases Expand High Fidelity. Cet excellent mélange d'enzymes à activité correctrice polymérise les sondes de 40 pb à 5 kb de long avec 10 pg d'ADN plasmidique ou 10 ng d'ADN génomique comme matrice. Les sondes marquées à la digoxigénine sont stables pendant plus d'un an.
Application
Les sondes d'ADN marquées à la digoxigénine (DIG) produites avec le kit de synthèse de sondes de PCR DIG peuvent être utilisées pour détecter des gènes d'ARNm rare présents en un petit nombre de copies (ou en copie unique) dans des analyses par southern blot et northern blot. Ces sondes d'ADN marquées à la DIG ont également été utilisées pour marquer de l'ADN en hybridation in situ.
La concentration du mélange de nucléotides dUTP fourni peut être ajustée en fonction de la longueur de la sonde. L'efficacité du marquage peut être rapidement déterminée sur un gel d'agarose.
Les membranes peuvent subir plusieurs déshybridations et réhybridations successives, conformément au protocole décrit dans la notice.
Une réaction de marquage par PCR (50 μl) produit en général suffisamment de sondes pour 20 ml de solution d'hybridation. Ce kit permet de réaliser environ 25 réactions (de 50 μl).
La concentration du mélange de nucléotides dUTP fourni peut être ajustée en fonction de la longueur de la sonde. L'efficacité du marquage peut être rapidement déterminée sur un gel d'agarose.
Les membranes peuvent subir plusieurs déshybridations et réhybridations successives, conformément au protocole décrit dans la notice.
Une réaction de marquage par PCR (50 μl) produit en général suffisamment de sondes pour 20 ml de solution d'hybridation. Ce kit permet de réaliser environ 25 réactions (de 50 μl).
Conditionnement
1 kit contenant 6 composants
Qualité
Chaque lot de kits de synthèse de sondes de PCR DIG est soumis à un contrôle fonctionnel par PCR. Les produits d'amplification sont analysés par southern blot d'ADN génomique.
Dans les conditions de PCR décrites dans la notice du produit, la réaction témoin donne un produit d'amplification de 442 pb. Étant donné que de multiples incorporations de DIG-dUTP se produisent au cours de la PCR, les produits de la PCR ont un poids moléculaire beaucoup plus élevé que le produit de PCR non marqué. Un profil de fragments spécifique est détecté après l'hybridation du produit de PCR sur 10 μg d'ADN génomique humain suivie d'une détection par chimioluminescence.
Dans les conditions de PCR décrites dans la notice du produit, la réaction témoin donne un produit d'amplification de 442 pb. Étant donné que de multiples incorporations de DIG-dUTP se produisent au cours de la PCR, les produits de la PCR ont un poids moléculaire beaucoup plus élevé que le produit de PCR non marqué. Un profil de fragments spécifique est détecté après l'hybridation du produit de PCR sur 10 μg d'ADN génomique humain suivie d'une détection par chimioluminescence.
Composants de kit seuls
Réf. du produit
Description
- Enzyme Mix, Expand High Fidelity 3.5 U/μl
- PCR DIG Probe Synthesis Mix, containing dATP, dCTP, dGTP (2 mM each) 10x concentrated
- PCR Buffer with MgCl2 10x concentrated
- dNTP Stock Solution, containing dATP, dCTP, dGTP, dTTP (2 mM each), pH 7.0 10x concentrated
- Control Template, plasmid DNA in Tris/EDTA buffer, pH 8.0. The 5-kb plasmid contains the cDNA for the human tissue-type plasminogen activator (tPA) 20 pg/μl
- Control PCR Primer Mix, containing 50 pmol of each primer, control PCR primer 1 and 2 2 mM each
Souvent commandé avec ce produit
Réf. du produit
Description
Tarif
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Aquatic Chronic 3
Code de la classe de stockage
12 - Non Combustible Liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 2
Point d'éclair (°F)
does not flash
Point d'éclair (°C)
does not flash
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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