MABS1352
Anticorps anti-N3-phosphohistidine (3-pHis), clone SC56-2
clone SC56-2, from rabbit
Synonyme(s) :
N3-Phosphohistidine
Se connecterpour consulter vos tarifs contractuels et ceux de votre entreprise/organisme
About This Item
Code UNSPSC :
12352203
eCl@ss :
32160702
Nomenclature NACRES :
NA.41
Produits recommandés
Source biologique
rabbit
Niveau de qualité
Forme d'anticorps
purified antibody
Type de produit anticorps
primary antibodies
Clone
SC56-2, monoclonal
Espèces réactives
human, E. coli
Réactivité de l'espèce (prédite par homologie)
all
Technique(s)
dot blot: suitable
western blot: suitable
Isotype
IgG
Conditions d'expédition
wet ice
Modification post-traductionnelle de la cible
phosphorylation (N3-pHis)
Description générale
La phosphorylation joue un rôle important dans la régulation de l'activité des protéines et de divers événements de signalisation cellulaire. Limitée par les outils disponibles pour la détection des phosphohistidines (pHis), la majorité des études se concentre sur la phosphorylation des sérines, des thréonines et des tyrosines. La phosphorylation de l'histidine peut se produire soit en N1 (1-pHis) soit en N3 (3-pHis) du cycle imidazole. Le développement de peptides contenant des analogues phosphoryltriazolylalanine stables de 1-pHis et 3-pHis (1-pTza et 3-pTza) permet de générer des anticorps pour étudier les phosphorylations N1 et N3 de l'histidine dans les événements de signalisation. Les preuves de l'implication des His kinases dans le cancer et les métastases tumorales sont de plus en plus nombreuses et le premier gène suppresseur de métastases identifié est l'une des deux His kinases de mammifères connues, Nm23-H1 (également connue sous le nom de NME1, nucléoside diphosphate kinase A, ou NDPK-A). Le Nm23-H1/NME1 et le Nm23-H2 (NME2/NDPK-B), qui lui est étroitement lié, catalysent le transfert du phosphate de l'ATP vers les nucléosides-diphosphates (NDP) par le biais d'un intermédiaire enzymatique 1-pHis. Les Nm23-H1/-H2 possèdent également une activité His kinase, qui transfère le phosphate du site actif pHis sur un His d'une protéine cible. Les enzymes métaboliques telles que la phosphoglycérate mutase (PGAM), la Succinyl-CoA synthétase (SCS) et l'ATP citrate lyase (ACL) utilisent également le pHis comme intermédiaire enzymatique. Contrairement à la NME1/2, la PGAM utilise le 3-pHis comme intermédiaire enzymatique. Outre les eucaryotes, la phosphorylation de l'histidine est bien documentée dans les voies de signalisation bactériennes 'à deux composants' impliquées dans la chimiotaxie, bien que le phosphate soit transféré du pHis formé dans la protéine récepteur/capteur aux résidus Asp d'une protéine régulatrice de la réponse de l'accepteur, et que la protéine récepteur/capteur fonctionne essentiellement comme une aspartate kinase.
Spécificité
Détecte sélectivement les protéines dont les histidines sont phosphorylées en N3 du cycle imidazole (3-pHis), mais pas les 1-pHis.
La modification ciblée ne présente pas de spécificité vis-à-vis de l'espèce.
Application
Analyse par dot blot : Un lot représentatif a détecté les peptides contenant un analogue de la phosphohistidine 3-pTza, mais pas les peptides contenant uniquement de la tyrosine phosphorylée. Le clone SC56-2 est le plus réactif vis-à-vis des peptides 3-pTza basés sur les séquences NM23-H1/NME1 3-pHis118 et PGAM 3-pHis11, moins réactif vis-à-vis de ceux basés sur les séquences ACLY 3-pHis760, histone H4 3-pHis18 ou Kca3.1 3-pHis358, et le moins réactif vis-à-vis de ceux basés sur la séquence GNB1 3-pHis266 (Fuhs, S.R., et al. (2015). Cell. 162(1):198-210).
Analyse par western blotting : Le surnageant de culture d'hybridomes du clone SC56-2 a été utilisé pour l'analyse par western blotting de la N3-phosphorylation sensible à la chaleur de l'histidine (3-pHis) de la protéine de fusion PGAM humaine - GST exprimée de manière exogène dans des lysats d'E. coli transformés (Fuhs, S.R., et al. (2015). Cell. 162(1):198-210).
Remarque : NE PAS CHAUFFER LES ÉCHANTILLONS avant la détection de la phosphohistidine. La phosphorylation de l'histidine est labile à la chaleur et en milieu acide. Pour générer un contrôle négatif pour le test de spécificité, une aliquote de l'échantillon peut être chauffée à 95 ºC pendant 10 à 15 minutes afin d'inverser la phosphorylation de l'histidine. Une aliquote de l'échantillon peut également être incubée sous un pH acidifié à 37 ºC pendant 15 minutes pour réduire la phosphorylation de l'histidine. Acidifier chaque échantillon de 100 µl avec 25 µl de HCl 1 M avant l'incubation, puis neutraliser avec 25 µl de NaOH 1 M avant la détection de la phosphohistidine.
Analyse par western blotting : Le surnageant de culture d'hybridomes du clone SC56-2 a été utilisé pour l'analyse par western blotting de la N3-phosphorylation sensible à la chaleur de l'histidine (3-pHis) de la protéine de fusion PGAM humaine - GST exprimée de manière exogène dans des lysats d'E. coli transformés (Fuhs, S.R., et al. (2015). Cell. 162(1):198-210).
Remarque : NE PAS CHAUFFER LES ÉCHANTILLONS avant la détection de la phosphohistidine. La phosphorylation de l'histidine est labile à la chaleur et en milieu acide. Pour générer un contrôle négatif pour le test de spécificité, une aliquote de l'échantillon peut être chauffée à 95 ºC pendant 10 à 15 minutes afin d'inverser la phosphorylation de l'histidine. Une aliquote de l'échantillon peut également être incubée sous un pH acidifié à 37 ºC pendant 15 minutes pour réduire la phosphorylation de l'histidine. Acidifier chaque échantillon de 100 µl avec 25 µl de HCl 1 M avant l'incubation, puis neutraliser avec 25 µl de NaOH 1 M avant la détection de la phosphohistidine.
L'anticorps anti-N3-phosphohistidine (3-pHis), clone SC56-2, est un anticorps monoclonal isomère-spécifique qui détecte spécifiquement l'histidine phosphorylée en position N3. Cet anticorps monoclonal (mAb) purifié est étayé par des données publiées démontrant sa performance en western blotting et en ''dot blot''.
Qualité
Produit évalué par le western blotting de la réaction de dégradation du 2,3-DPG catalysée par la PGAM.
Analyse par western blotting : Une concentration de 0,52 µg/mL de cet anticorps a permis de détecter la phosphoglycérate mutase (PGAM) humaine recombinante avec la N3-phosphohistidine (3-pHis) dans une aliquote de 5 µg de la réaction de dégradation du 2,3-diphosphoglycérate (2,3-DPG) catalysée par la PGAM.
Analyse par western blotting : Une concentration de 0,52 µg/mL de cet anticorps a permis de détecter la phosphoglycérate mutase (PGAM) humaine recombinante avec la N3-phosphohistidine (3-pHis) dans une aliquote de 5 µg de la réaction de dégradation du 2,3-diphosphoglycérate (2,3-DPG) catalysée par la PGAM.
Description de la cible
Variable en fonction des protéines phosphorylées sur l'histidine.
Forme physique
Format : purifié
Autres remarques
Concentration : voir la fiche technique du lot concerné.
Vous ne trouvez pas le bon produit ?
Essayez notre Outil de sélection de produits.
En option
Code de la classe de stockage
12 - Non Combustible Liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 1
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
Déjà en possession de ce produit ?
Retrouvez la documentation relative aux produits que vous avez récemment achetés dans la Bibliothèque de documents.
Lingyuan Kong et al.
Frontiers in microbiology, 13, 820089-820089 (2022-05-14)
In Streptococcus mutans, we find that the histidine kinase WalK possesses the longest C-terminal tail (CTT) among all 14 TCSs, and this tail plays a key role in the interaction of WalK with its response regulator WalR. We demonstrate that
Jianliang Zhang et al.
Oncogene, 42(6), 449-460 (2022-12-14)
Current clinical therapies targeting receptor tyrosine kinases including focal adhesion kinase (FAK) have had limited or no effect on esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). Unlike esophageal adenocarcinomas, ESCC acquire glucose in excess of their anabolic need. We recently reported that
Monoclonal 1- and 3-Phosphohistidine Antibodies: New Tools to Study Histidine Phosphorylation.
Fuhs, SR; Meisenhelder, J; Aslanian, A; Ma, L; Zagorska, A; Stankova, M; Binnie et al.
Cell null
Jianliang Zhang et al.
Cellular and molecular gastroenterology and hepatology, 8(1), 37-60 (2019-03-06)
Most targeted therapies against cancer are designed to block growth factor-stimulated oncogenic growth. However, response rates are low, and resistance to therapy is high. One mechanism might relate to the ability of tumor cells to induce growth factor-independent proliferation (GFIP).
Junyao Yang et al.
Stem cells (Dayton, Ohio), 38(4), 556-573 (2019-11-14)
Histone deacetylase 7 (HDAC7) plays a pivotal role in the maintenance of the endothelium integrity. In this study, we demonstrated that the intron-containing Hdac7 mRNA existed in the cytosol and that ribosomes bound to a short open reading frame (sORF)
Notre équipe de scientifiques dispose d'une expérience dans tous les secteurs de la recherche, notamment en sciences de la vie, science des matériaux, synthèse chimique, chromatographie, analyse et dans de nombreux autres domaines..
Contacter notre Service technique