Caractérisation de vecteurs viraux et contrôles de biosécurité

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Matières premières

Pour un grand nombre de nouvelles thérapies, notamment les thérapies cellulaires, il est très difficile d'éliminer les produits d'origine humaine ou animale du procédé de fabrication. Si ces matières sont utilisées, il est indispensable qu'elles fassent l'objet de contrôles poussés pour s'assurer de l'absence d'agents non endogènes.

Banques de cellules

Les banques de cellules utilisées pour produire des thérapies biologiques doivent être entièrement caractérisées, conformément à la règlementation applicable aux produits biologiques, et soumises à des tests poussés pour garantir l'absence d'agents non endogènes. Ces tests peuvent inclure le contrôle du type de cellule, la recherche de bactéries, de champignons, de mycoplasmes voire de mycobactéries, des tests viraux à large spécificité ainsi que des tests de dépistage de rétrovirus ou de virus spécifiques.

Récolte en vrac non purifiée

Le contrôle qualité des récoltes en vrac non purifiées, qui peuvent contenir des cellules productrices transfectées, doit prévoir la vérification de l'identité et éventuellement la confirmation du gène d'intérêt. C'est également à ce stade qu'il convient de déterminer le titre des vecteurs. L'absence de vecteurs viraux compétents pour la réplication doit aussi être confirmée. Parmi les autres contrôles adaptés à cette matière première, citons la recherche de microorganismes (bactéries, champignons, mycoplasmes…) et les tests à large spécificité pour le dépistage de virus non endogènes.

Clairance virale

Contrairement aux produits biopharmaceutiques classiques et aux vecteurs viraux non enveloppés (comme les virus adéno-associés et les adénovirus), il est impossible de revendiquer la clairance virale du procédé de fabrication des vecteurs viraux enveloppés tels que les rétrovirus et les lentivirus. En effet, il n'est pas possible de séparer ou d'inactiver les contaminants viraux éventuels sans compromettre l'intégrité du produit. Des étapes d'inactivation et d'élimination des virus peuvent toutefois être intégrées dans le procédé de fabrication des vecteurs viraux non enveloppés, ce qui permet de revendiquer la réduction virale de bon nombre de ces procédés.

Récolte en vrac purifiée

Le contrôle qualité des récoltes en vrac purifiées doit inclure une vérification de l'identité, comme la confirmation du gène d'intérêt et la confirmation du sérotype de virus adéno-associé (AAV). La quantification du titre infectieux, du titre génomique et de la puissance sont des tests adaptés à cette matière première. Il convient également de confirmer l'absence de contamination microbienne et de vecteurs compétents pour la réplication. Enfin, il est recommandé de vérifier l'absence d'impuretés résiduelles provenant du produit ou du procédé.

Produit fini

L'identité du vecteur final doit être confirmée. Les contrôles qualité peuvent inclure le séquençage du gène d'intérêt ainsi que l'évaluation du titre infectieux, du titre génomique et de la puissance. Il convient également d'analyser la stérilité et le taux d'endotoxines. Enfin, les caractéristiques du produit final doivent être déterminées, notamment l'agrégation des vecteurs, le pH, l'osmolalité, l'aspect et les particules.

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