Epigenética
A epigenética descreve mudanças que são alterações estáveis, mas potencialmente reversíveis na expressão gênica que ocorrem sem mudanças permanentes na sequência do DNA e ainda podem ser passadas de geração em geração. Genes com controle epigenético são ativados ou suprimidos sem nenhuma alteração no DNA. Três mecanismos epigenéticos centrais que desempenham um papel essencial na regulação de genes foram extensamente estudados por pesquisadores, incluindo metilação do DNA, modificação de histonas e regulação de RNA. Nosso portfólio abrangente e combinado de epigenética oferece produtos de alta qualidade para realizar as técnicas usadas para estudar todos os três mecanismos centrais da epigenética.
Modificação de histonas
A cromatina é o complexo de DNA genômico e proteínas associadas no núcleo. Modificações na estrutura da cromatina e as interações entre as proteínas da cromatina desempenham um papel direto na regulação epigenética. A estrutura da cromatina é modulada por histonas, uma classe importante de proteínas da cromatina. As histonas formam o nucleossomo, um complexo contendo 2 subunidades cada de histonas H2A, H2B, H3 e H4. Do lado de fora do complexo central, a histona H1 ligante ocupa o DNA internucleossômico. Este complexo com o nucleossomo mantém a estrutura compactada da cromatina. Modificações de histonas em sítios específicos, como metilação, acetilação, fosforilação, ubiquitinação e citrulinação podem alterar a estrutura da cromatina local e regular a transcrição, reparo, recombinação e replicação. Proteínas não histonas associadas à cromatina são um grupo diversificado, com milhares de tipos diferentes de proteínas, incluindo fatores de transcrição, polimerases, receptores hormonais e outras enzimas nucleares.
Metilação do DNA
A metilação do DNA é um mecanismo epigenético importante que regula o silenciamento gênico, o imprinting de genes, o desenvolvimento embrionário e a estabilidade cromossômica. A metilação do DNA ocorre na posição 5-carbono de resíduos da citosina, principalmente dentro de dinucleotídeos CpG para formar 5-metilcitosinas (5-mC). A reação é catalisada por DNA metiltransferases (DNMTs). Os resíduos de 5-metilcitosinas também podem ser hidroxilados por enzimas TET para formar 5-hidroximetilcitosina (5-hmC), que tem funções diferentes da 5-mC. Fornecemos ferramentas robustas que não apenas lhe possibilitam detectar e quantificar 5-mC e 5-hmC, mas também distinguir com precisão essas modificações.
Kits de imunoprecipitação da cromatina (ChIP)
A detecção quantitativa de modificações de histonas é importante para entender melhor a regulação epigenética de processos celulares em tecidos normais ou cancerosos. A técnica mais amplamente usada para estudar como modificações de histonas e outras proteínas de ligação ao DNA, como fatores de transcrição, influenciam a expressão gênica se chama imunoprecipitação da cromatina (ChIP) combinada com reação em cadeia da polimerase qualitativa (qPCR). A ChIP envolve a reticulação química de proteínas a sequências de DNA, o que é seguido por imunoprecipitação dos complexos reticulados usando anticorpos e esferas para precipitar a histona modificada ou outras proteínas de interesse. As modificações de histonas mais estudadas e compreendidas são acetilação, fosforilação, metilação e ubiquitinação. Modificações de histonas regulam a transcrição, reparo, recombinação e replicação do DNA e podem alterar a arquitetura da cromatina local. Explore nossa ampla gama de kits para analisar padrões complexos de modificações de histonas.
Controle transcricional e pós-transcricional: Regulação de RNA
Tradicionalmente, a pesquisa de expressão gênica se concentrou na regulação da transcrição por meio de interações de fatores de transcrição com sítios de ligação específicos, modificações de histonas dentro da cromatina e dinâmica coordenada da cromatina associadas a mudanças na transcrição gênica. A pesquisa de expressão gênica atual busca entender a dinâmica da regulação de RNA, com o objetivo final de fazer a ponte entre o controle da transcrição e a expressão de proteínas. As proteínas de ligação ao RNA (RBPs) desempenham um papel importante na regulação pós-transcricional da expressão gênica.
Regulação de RNA: Kits de imunoprecipitação de proteínas de ligação ao RNA (RIP)
A RIP pode ser considerada o análogo para o RNA da aplicação de ChIP mais conhecida. A RIP pode ser usada para identificar moléculas específicas de RNA associadas a proteínas de ligação citoplásmica ou nuclear específicas. A RIP começa com a imunoprecipitação de complexos endógenos de proteínas de ligação ao RNA e coisolamento de espécies de RNA associadas ao complexo imunoprecipitado. Após a purificação dessas espécies de RNA, elas podem ser analisadas e identificadas como mRNAs ou RNAs não codificantes por diversas aplicações, incluindo RT-PCR quantitativa, análise de microarranjos (RIP-Chip) e sequenciamento de alto rendimento (RIP-Seq).
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