P8375

Peroxidase

Type VI, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)

• Sinônimo(s): Enzima de detecção, HRP, Peroxidase, Doador:peróxido de hidrogênio oxidorredutase, Peroxidase de raiz forte
• Número CAS: 9003-99-0
• Número da licença da enzima: 1.11.1.7 (BRENDA, IUBMB)
• Número CE: 232-668-6
• Número MDL: MFCD00071339
• Código UNSPSC: 12352204
• eCl@ss: 32160410
• NACRES: NA.54

Propriedades

• tipo: Type VI
• Nível de qualidade: 300
• forma: essentially salt-free, lyophilized powder
• atividade específica: ≥250 units/mg solid (using pyrogallol)
• peso molecular: ~44 kDa
• solubilidade: 0.1 M phosphate buffer: soluble 10 mg/mL, clear, orange to red (pH 6.0)
• razão de absorbância: RZ 2.5-4.0
• aplicação(ões): diagnostic assay manufacturing
• temperatura de armazenamento: 2-8°C
• InChI: 1S/H2O3/c1-3-2/h1-2H
• chave InChI: JSPLKZUTYZBBKA-UHFFFAOYSA-N

Descrição

Descrição geral

A peroxidase de raiz forte é isolada da raiz de Amoracia rusticana e pertence ao grupo ferroprotoporfirínico de peroxidases. A HRP é um polipeptídeo de cadeia simples com quatro pontes dissulfeto. É uma glicoproteína que contém 18% de carboidratos. A composição de carboidratos consiste em galactose, arabinose, xilose, fucose, manose, manosamina e galactosamina, dependendo da isoenzima específica. O peso molecular (~44 kDa) inclui a cadeia polipeptídica (33.890 Daltons), hemina mais Ca²⁺ (~700 Daltons) e carboidratos (~9.400 Daltons). Existem no mínimo sete isoenzimas de HRP. O ponto isoelétrico das isoenzimas de peroxidase de raiz forte varia entre 3,0 e 9,0.

Aplicação

A enzima foi usada para desenvolver um biossensor à base de peroxidase de soja termoestável por meio de reticulação e “eletrificação” (wiring) da enzima através de um hidrogel condutor de redox para um eletrodo de carbono vítreo. Ela também foi usada em ensaios de oxidação de lipoproteínas de baixa densidade.

A peroxidase de raiz forte (HRP) é isolada da raiz de Amoracia rusticana e pertence ao grupo ferroprotoporfirínico de peroxidases. Ela é usada em aplicações bioquímicas, como Western blot, ELISA e imuno-histoquímica. A peroxidase de raiz forte é usada para amplificar um sinal fraco e aumentar a detectabilidade de uma molécula-alvo, como uma proteína. O produto P8375, tipo VI, é um pó liofilizado essencialmente livre de sais. Geralmente ele é usado para determinar a quantidade de glicose e peróxidos em soluções. Ele foi usado para estudar as informações sensoriais recebidas pelos neurônios da medula espinhal cervical.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A HRP se combina facilmente com peróxido de hidrogênio (H₂O₂), e o complexo [HRP-H₂O₂] resultante pode oxidar uma grande variedade de doadores de hidrogênio. O pH ótimo é 6,0-6,5, e a enzima é mais estável na faixa de pH de 5,0 a 9,0. A HRP pode ser conjugada a anticorpos por vários métodos diferentes, como glutaraldeído, oxidação com periodato, por meio de ligações dissulfeto e via reticulantes direcionados a amino e tiol. Ela é menor e mais estável que os marcadores enzimáticos β-galactosidase e fosfatase alcalina e, portanto, é o marcador preferencial. Além disso, sua glicosilação diminui a formação de ligações inespecíficas.

Quando incubada com um substrato, a peroxidase de raiz forte produz um derivado colorido, fluorimétrico ou luminescente da molécula marcada, o que possibilita a quantificação. Demonstrou-se que a peroxidase de raiz forte reduz ligeiramente o nível de inibição do mutante cydAB. Os inibidores conhecidos são azida sódica, cianeto, L-cistina, dicromato, etilenotioureia, hidroxilamina, sulfeto, vanadato, ácido p-aminobenzoico e íons Cd²⁺, Co²⁺, Cu²⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Ni²⁺ e Pb²⁺.

Definição da unidade

Uma unidade de pirogalol forma 1,0 mg de purpurogalina a partir do pirogalol em 20 segundos em pH 6,0 a 20 °C.

Nota de análise

RZ (Reinheitszahl) é a taxa de absorbância A₄₀₃/A₂₇₅ determinada a 0,5-1,0 mg/ml em água deionizada. É uma medida do teor de hemina, e não da atividade enzimática. Mesmo preparações com RZ alto podem ter atividade enzimática baixa.

Outras notas

Veja mais informações sobre peroxidase em www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS08
• Palavra indicadora: Danger
• Frases de perigo: H317 - H334
• Declarações de precaução: P261 - P272 - P280 - P284 - P302 + P352 - P333 + P313
• Classificações de perigo: Resp. Sens. 1 - Skin Sens. 1
• Código de classe de armazenamento: 11 - Combustible Solids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 3
• Equipamento de proteção individual: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)