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Sigma-Aldrich

Mistura para RT-qPCR KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix

for Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Illumina, Corbett, and Roche systems

Sinônimo(s):

Mistura para RT-qPCR KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix

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About This Item

Código UNSPSC:
41106300
NACRES:
NA.55

Formulário

liquid

uso

sufficient for 500 reactions

Características

dNTPs included
hotstart

condição de armazenamento

protect from light

técnica(s)

qPCR: suitable

cor

light blue

entrada

purified RNA

compatibilidade

Bio-Rad CFX384
Bio-Rad CFX96
Bio-Rad MJ Chromo4
Bio-Rad MJ Opticon 2
Bio-Rad MJ Opticon
Bio-Rad MiniOpticon
Eppendorf® Mastercycler ep realplex2 s
Eppendorf® Mastercycler ep realplex
Illumina Eco qPCR
Qiagen Corbett Rotor-Gene 3000
Qiagen Corbett Rotor-Gene 6000
Qiagen Corbett Rotor-Gene Q
Roche LightCycler 480

método de detecção

probe-based

Condições de expedição

dry ice

temperatura de armazenamento

−20°C

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Descrição geral

A mistura para RT-qPCR KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMixé uma mistura-mestre pronta para uso e altamente sensível para PCR quantitativa com transcrição reversa (RT-qPCR) de moldes de RNA usando produtos químicos para detecção por sondas de hibridização, como sondas de hidrólise de 5′ TaqMan®, em sistemas de PCR em tempo real (vide a seção de compatibilidade com instrumentos para selecionar o reagente adequado para o seu equipamento). A síntese da primeira fita de cDNA e a amplificação de PCR são realizadas no mesmo tubo, sem que seja aberto entre os procedimentos. Ela é ideal para quantificação altamente sensível de vírus de RNA ou alvos de RNA pouco abundantes, bem como estudos de expressão gênica de alto rendimento. O sistema foi otimizado para oferecer máxima eficiência, sensibilidade e especificidade de RT-PCR em volumes de reação reduzidos e ciclos de rápida duração.

A mistura para RT-qPCR KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMixcontém todos os componentes necessários para RT-qPCR, exceto o molde de RNA e a sonda. Ela é compatível com todas as composições químicas de sondas duplamente marcadas. A transcriptase reversa é um M-MLV (vírus da leucemia murina de Moloney) modificado, com atividade reduzida de RNase H e maior atividade e estabilidade em temperaturas mais altas. O uso de temperaturas mais altas (50 ºC a 55 °C) na etapa da primeira fita da RT-qPCR em etapa única proporciona maior especificidade para hibridização do primer e rompimento da estrutura secundária do RNA que pode interferir na síntese de cDNA.

A mistura para RT-qPCR KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix é altamente resistente a inibidores de PCR. Um componente-chave da mistura ReadyMix é uma DNA polimerase ultrapura, altamente processiva e termoestável, que é combinada com anticorpos monoclonais com avidez elevada. Isso proporciona uma reação hot start automática extremamente rigorosa que minimiza o potencial de formação de dímeros de primer e outros artefatos de PCR não específicos. A cor azul-claro do corante inerte simplifica a montagem da reação em placas brancas ou transparentes e ajuda a minimizar erros de pipetagem ou mistura. O corante não interfere no desempenho de qPCR nem afeta a estabilidade do produto.

Aplicação

O KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix foi usado:
  • na reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) para estudos de expressão gênica
  • na análise de transcrição específica do tipo de célula para determinar o valor do limiar do ciclo (Ct)
  • para detecção do RNA do coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) em swabs nasofaríngeose orofaríngeos
  • para amplificação de cDNA transcrito reversamente

Características e benefícios

  • Resultados de ensaio em apenas 33 minutos
  • Resultados de PCR em tempo real altamente eficientes e sensíveis
  • Pouca/nenhuma otimização necessária

Componentes

Tampão de reação 2X que contém dATP, dCTP, dGTP, dTTP, cloreto de magnésio, transcriptase reversa, proteína inibidora de RNase, DNA polimerase para hot-start, corante de qPCR azul inerte e estabilizantes

embalagem:
500 reações* = 5 X tubos de 1 ml
*número de reações com base em um volume de 20 ul

Outras notas

Diferentes sistemas de PCR em tempo real empregam diferentes estratégias para normalização de sinais fluorescentes e correção de variações ópticas de um poço para outro. É fundamental associar o reagente de qPCR adequado ao seu instrumento específico. A mistura para RT-qPCR KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix não contém um corante de referência interno. Instrumentos compatíveis incluem:
  • CFX384 da Bio-Rad®
  • CFX96 da Bio-Rad
  • MiniOpticon da Bio-Rad
  • Chromo4 da Bio-Rad/MJ
  • Opticon 2 da Bio-Rad/MJ
  • Opticon da Bio-Rad/MJ
  • SmartCycler da Cepheid®
  • Eppendorf Mastercycler® ep realplex
  • Eppendorf Mastercycler ep realplex2 s
  • Eco de qPCR da Illumina
  • Rotor-Gene® 3000 da Qiagen/Corbett
  • Rotor-Gene 6000 da Qiagen/Corbett• Rotor-Gene Q da Qiagen/Corbett
  • LightCycler® 480 da Roche

Informações legais

Bio-Rad is a registered trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.
CFX384 is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.
CFX96 is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.
Chromo4 is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.
Eppendorf is a registered trademark of Eppendorf AG
KiCqStart is a registered trademark of QIAGEN Beverly Inc.
LightCycler is a registered trademark of Roche
Mastercycler is a registered trademark of Eppendorf AG
MiniOpticon is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.
Opticon is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.
ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC
Rotor-Gene is a registered trademark of Qiagen GmbH
SmartCycler is a registered trademark of Cepheid, Inc.
TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.

Código de classe de armazenamento

12 - Non Combustible Liquids

Classe de risco de água (WGK)

WGK 3

Ponto de fulgor (°F)

Not applicable

Ponto de fulgor (°C)

Not applicable


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