2GRHSRMKB

Mistura ReadyMix KAPA2G Robust para hotstart

2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)

• Sinônimo(s): PCR, hotstart PCR
• Código UNSPSC: 41106300
• NACRES: NA.55

Propriedades

• uso: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Nível de qualidade: 100
• prazo de validade: ≤12 mo.
• Características: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart
• embalagem: pkg of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5701); pkg of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5702)
• fabricante/nome comercial: Roche
• concentração: 2 × ( contains 2 mM MgCl₂ at 1×)
• técnica(s): PCR: suitable
• entrada: crude DNA
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

A DNA polimerase KAPA2G Robust de segunda geração foi desenvolvida para solucionar a amplificação inconsistente em uma ampla gama de tipos de amplicon (com alto teor de GC e AT). A mistura ReadyMix^™ KAPA2G Robust para hotstart^® permite maior processividade e atividade específica, que se traduz em desempenho de PCR robusto, alta sensibilidade e maior tolerância a inibidores comuns. O alto desempenho da DNA polimerase KAPA2G Robust é ideal para aplicações complicadas de PCR e amostras difíceis, eliminando a necessidade de otimização usando diversas enzimas e protocolos.

Aplicação

• Amplificação de moldes com alto teor de GC ou AT
• Moldes contendo inibidores comuns de PCR, p.ex., sais, ureia, SDS ou etanol.
• PCR de amostras brutas, p. ex., swabs bucais, células de mamíferos, levedura ou bacterianas cultivadas
• PCR em colônias
• Extração e amplificação de DNA
• Triagem de mutações

Ações bioquímicas/fisiológicas

Fragmentos de DNA gerados com a DNA polimerase KAPA2G Robust para hotstart^® têm as mesmas características dos fragmentos de DNA gerados com Taq DNA polimerase do tipo selvagem e podem ser usados para análises ou aplicações a jusante (downstream) de rotina, inclusive digestão por enzimas de restrição, clonagem e sequenciamento. Assim como a Taq do tipo selvagem, a KAPA2G Robust para hotstart tem atividade de polimerase 5′→3′ e exonuclease 5′→3′, mas não apresenta atividade de exonuclease 3′→5′ (de revisão). A fidelidade da KAPA2G Robust para hotstart é semelhante à da Taq do tipo selvagem; ela tem uma taxa de erro de aproximadamente 1 erro por 1,7 x 105 nucleotídeos incorporados. Os produtos da PCR gerados por KAPA2G Robust para hotstart têm caudas 3′-dA e podem ser clonados em vetores de clonagem TA.

Características e benefícios

Amplificação eficiente de alvos com alto teor de GC e AT

• Desempenho robusto em uma ampla gama de moldes com alto teor de GC e AT
• Taxas de sucesso de PCR aumentadas

Maior tolerância a inibidores comuns de PCR

• Amplificação eficiente a partir de amostras brutas
• Rendimento e sensibilidade maiores por unidade de enzima

Desempenho incomparável em PCR em colônias

• Maior rendimento e consistência aprimorada de PCR direta em E. coli e células de levedura

Observações rápidas:

• Os kits para PCR de mistura ReadyMix KAPA2G Robust para hotstart contém KAPA2G Robust DNA polimerase, projetada para alta processividade e tolerância a inibidores.
• Tanto amostras de DNA genômico purificadas quanto brutas (p. ex., PCR em colônias) podem ser usadas como molde.
• Use tempo de extensão de 15 s/kb por ciclo e aumente para 30-60 s/kb para amplicons ou moldes difíceis.
• A mistura ReadyMix KAPA2G Robust para hotstart contém MgCl₂ 2 mM em concentração 1X.
• A mistura ReadyMix KAPA2G Robust para hotstart com corante inclui dois corantes de rastreamento inertes para permitir o carregamento direto em gel de agarose.
• A mistura ReadyMix KAPA2G Robust para hotstart é ideal para PCR de protocolo único, ou seja, amplificação de fragmentos que variam de 25%–65% de GC, até 1 kb de tamanho, usando um protocolo de preparo e ciclagem de reação única.
• Os produtos da reação têm caudas 3′-dA e podem ser clonados em vetores de clonagem TA.

Qualidade

Confirma-se que cada lote de DNA polimerase KAPA2G Robust para hotstart contém <2% de proteína contaminante (ensaio de proteína 230 da Agilent). Os kits de PCR com mistura ReadyMix KAPA2G Robust para hotstart são submetidos a testes rigorosos de controle de qualidade, são isentos de atividade de exo e endonucleases contaminantes e atendem a requisitos rigorosos com relação aos níveis de contaminação do DNA.

Nota de preparo

Certifique-se sempre de o produto ter sido completamente descongelado e misturado antes do uso. Os reagentes podem ser armazenados a 4 °C para uso em curto prazo (até 1 mês). Retornar a –20 °C para armazenamento de longo prazo. Contanto que todos os componentes tenham sido manuseados com cuidado e não contaminados, não se espera que o kit seja comprometido se deixado (inadvertidamente) em temperatura ambiente por um curto período (até 3 dias). O armazenamento de longo prazo em temperatura ambiente e 4 ºC não é recomendado. Observe que os reagentes armazenados em temperatura acima de –20 ºC são mais propensos a degradação quando contaminados durante o uso e, portanto o armazenamento nessas temperaturas é de total responsabilidade do usuário.

Outras notas

Somente para fins de pesquisa. Não é destinado ao uso em procedimentos diagnósticos.

Informações legais

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Somente componentes do kit

• KAPA2G Robust HotStart^® DNA Polymerase 1U per 25 µL reaction
• MgCl₂ 2mM at 1X
• dNTP Mix 0.2 mM of each dNTP at 1X

Informações de segurança

• Pictogramas: GHS07,GHS08
• Palavra indicadora: Warning
• Frases de perigo: H302,H371
• Declarações de precaução: P260 - P264 - P270 - P301 + P312 + P330 - P308 + P311 - P501
• Classificações de perigo: Acute Tox. 4 Oral - STOT SE 2
• Código de classe de armazenamento: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): does not flash
• Ponto de fulgor (°C): does not flash