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ChIPAb+ EZH2, clone AC22 - anticorpo e conjunto de primers validados para uso em ChIP

clone AC22, from mouse

• Sinônimo(s): Enhancer of zeste homolog 2, Lysine N-methyltransferase 6, enhancer of zeste 2, enhancer of zeste homolog 2, ENX-1
• Código UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.32

Propriedades

• fonte biológica: mouse
• Nível de qualidade: 100
• clone: AC22, monoclonal
• reatividade de espécies: mouse, rat, vertebrates, human
• fabricante/nome comercial: ChIPAb+; Upstate^®
• técnica(s): ChIP: suitable; western blot: suitable
• Isotipo: IgG2a
• nº de adesão NCBI: NP_004447.2
• nº de adesão UniProt: Q15910
• Condições de expedição: dry ice
• Informações sobre genes: human ... EZH2(2146)

Descrição

Descrição geral

EZH2 é uma proteína do grupo polycomb (PcG) que é uma subunidade catalítica do complexo PRC2/EED-EZH2, a qual metila ′Lys-9′ (H3K9me) e ′Lys-27′ (H3K27me) da histona H3, levando à repressão da transcrição do gene-alvo afetado. Capaz de mono, di e trimetilar a ′Lys-27′ da histona H3 para formar H3K27me1, H3K27me2 e H3K27me3, respectivamente. Em comparação com complexos que contêm EZH2, ele é mais abundante em células-tronco embrionárias e desempenha um papel importante na formação de H3K27me3, que é necessário para a identidade e diferenciação adequada das células-tronco embrionárias. O complexo PRC2/EED-EZH2 também pode servir como uma plataforma de recrutamento para DNA metiltransferases, ligando assim dois sistemas de repressão epigenética. Os genes reprimidos pelo complexo PRC2/EED-EZH2 incluem HOXC8, HOXA9, MYT1, CDKN2A e os genes-alvo do ácido retinoico. A EZH2 também pode metilar proteínas não histonas, como o fator de transcrição GATA4 e o receptor nuclear RORA. Regula o relógio circadiano através da metilação de histonas no promotor dos genes circadianos. Essencial para a repressão mediada por CRY1/2 da ativação da transcrição de PER1/2 pelo heterodímero CLOCK-ARNTL/BMAL1; envolvido na di e trimetilação de ′Lys-27′ da histona H3 nos promotores PER1/2, o que é necessário para as proteínas CRY1/2 inibirem a transcrição.

Todos os anticorpos ChIPAb+ são validados individualmente para precipitação da cromatina: todos os lotes, sempre. Cada conjunto de anticorpo ChIPAb+ inclui primers de controle (todos os lotes testados por qPCR) para validar biologicamente os seus resultados de IP em um contexto específico para o loco. O protocolo de qPCR e as sequências de primers são fornecidos, o que permite que pesquisadores validem os protocolos de ChIP quando usam nosso anticorpo no seu contexto de cromatina. Cada conjunto também inclui um anticorpo de controle negativo para garantir a especificidade da reação de ChIP.
O anticorpo ChIPAb+ EZH2, clone Ac22/conjunto de primers inclui o anticorpo antiEZH2, clone AC22, um anticorpo de controle negativo (IgG de camundongo purificada) e primers para qPCR que amplificam uma região de 135 pb no promotor do gene MYT-1 humano. O anticorpo antiEZH2, clone AC22, e os anticorpos de controle negativo são fornecidos em um tamanho de reação escalonável "de acordo com a técnica de ChIP" e podem ser usados para validar funcionalmente a precipitação da cromatina associada a EZH2.

Especificidade

Não testado em outras espécies. A sequência do imunogênio é idêntica em várias espécies animais e vegetais, portanto, espera-se que haja ampla reatividade cruzada.

Reconhece EZH2, Peso molecular: aprox. 85-100 kDa.

Imunogênio

Epítopo: a.a. 353-451

O anticorpo purificado antiEZH2, clone AC22, é produzido contra uma proteína de fusão GST correspondente aos aminoácidos 353-451 da EZH2 humana.

Aplicação

Imunoprecipitação da cromatina:
dados de lotes representativos.
Cromatina sonicada preparada a partir de células HeLa S3 (4 X 10⁶ equivalentes celulares por IP) que foi submetida a imunoprecipitação da cromatina usando 1 µg de uma IgG de camundongo normal ou anticorpo antiEZH2, clone AC22, e o kit Magna ChIP G (N.º do cat. 17-611).
A imunoprecipitação bem-sucedida dos fragmentos de DNA associados a EZH2 foi verificada por qPCR usando os primers das regiões promotoras de GAPDH (negativo) e MYT-1 (positivo) (vide as figuras). Os dados são apresentados como aporte percentual de cada amostra de IP em relação ao aporte de cromatina para cada amplicon e amostra de ChIP, conforme indicado.
Consulte o protocolo do EZ-Magna G ChIP (N.º do cat. 17-409) ou EZ-ChIP (N.º do cat. 17-371) para ver os detalhes dos experimentos.

Análise por imunoprecipitação:
dados de lotes representativos.
O extrato nuclear de células HeLa foi imunoprecipitado com anticorpo antiEZH2, clone AC22, ou IgG de camundongo e, em seguida, separado por eletroforese, transferido para PVDF e foi adicionado o item do catálogo N.º 05-1319, anticorpo antiEZH2, clone BD43 (diluição de 1:1000).
As proteínas foram visualizadas usando um anticorpo secundário anticamundongo de cabra, conjugado com HRP (N.º do cat. AP124P) e um sistema de detecção por quimioluminescência.
(Vide as figuras).
Faixa 1: o extrato nuclear de células HeLa imunoprecipita com anticorpo antiEZH2, clone AC22.
Faixa 2: o extrato nuclear de células HeLa imunoprecipita com IgG.

Anticorpo antiEZH2, clone AC22, validado para uso em ChIP e conjunto de primers, incluindo o anticorpo de grau para ChIP e os primers de controle de PCR específicos usados para a imunoprecipitação da cromatina de EZH2.

Categoria de pesquisa
Epigenética e função nuclear

Apoptose e câncer

Subcategoria de pesquisa
Biologia da cromatina

Embalagem

25 ensaios por conjunto. Uso recomendado: aprox. 2 μg de anticorpo por imunoprecipitação da cromatina (depende do contexto biológico).

Qualidade

Imunoprecipitação da cromatina:
cromatina sonicada preparada a partir de células HeLa S3 (4 X 10⁶ equivalentes celulares por IP) que foi submetida a imunoprecipitação da cromatina usando 2 µg de uma IgG de camundongo normal ou anticorpo antiEZH2, clone AC22, e o kit Magna ChIP^® G (N.º do cat. 17-611). A imunoprecipitação bem-sucedida dos fragmentos de DNA associados a EZH2 foi verificada por qPCR usando primers de controle (vide as figuras).
Consulte o protocolo do EZ-Magna ChIP G (N.º do cat. 17-409) ou EZ-ChIP (N.º do cat. 17-371) para obter informações sobre os experimentos.

Descrição-alvo

aprox. 85 kDa

forma física

EZH2, clone AC22 (IgG2a monoclonal de camundongo). Um frasco contendo 50 μg de anticorpo purificado de proteína G em 50 μL de tris-glicina 0,1 M, NaCl 0,15 M, azida de sódio a 0,05%, pH 7,4 antes da adição de glicerol a 30%. Armazene a –20 °C.

IgG de camundongo normal. Dois frascos, cada um contendo 25 μg de IgG de camundongo purificada em 25 μl de tampão de armazenamento contendo 0,1% de azida sódica. Armazene a –20 °C.

Primers de ChIP para a região promotora de MYT-1. Um frasco contendo 75 μl de 5 μM de cada primer específico para a região promotora do MYT-1 humano. Armazene a –20 °C.
PARA: ACA AAG GCA GAT ACC CAA CG
REV: GCA GTT TCA AAA AGC CAT CC

Formato: Purificado

Armazenamento e estabilidade

Estável por 1 ano a -20 °C a partir da data de recebimento. Recomendações de manuseio: após o primeiro descongelamento e antes de remover a tampa, centrifugue o frasco e misture delicadamente a solução. Separe as alíquotas em tubos de microcentrífuga e armazene a –20 °C. Evite ciclos repetidos de congelamento/descongelamento, pois podem danificar a IgG e afetar o desempenho do produto.

Nota de análise

Controle
Inclui anticorpo IgG de camundongo de controle negativo e primers específicos para a região promotora do gene MYT-1 humano.

Informações legais

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Exoneração de responsabilidade

Exceto quando indicado em contrário em nosso catálogo ou em outros documentos da empresa que acompanham o(s) produto(s), os nossos produtos destinam-se somente ao uso em pesquisa e não devem ser usados para qualquer outra finalidade, o que inclui, dentre outros, usos comerciais não autorizados, usos para diagnóstico in vitro, usos terapêuticos ex vivo ou in vivo, ou qualquer tipo de consumo ou aplicação em humanos ou animais.

Informações de segurança

• Código de classe de armazenamento: 10 - Combustible liquids