Resolução de problemas em culturas celulares

A cultura celular se tornou uma das técnicas mais importantes para modelagem de sistemas biológicos e é de crescente importância nos setores de biotecnologia e farmacêutico, bem como um processo essencial em laboratórios de pesquisas em ciências biológicas. Embora esta técnica seja altamente acessível, a propagação bem-sucedida de células para ampliamento de estoque ou modelagem de experimentos pode ser prejudicada por contaminação ou outras condições que afetem negativamente a viabilidade celular. A prática comum de compartilhar células levou a evidências amplamente publicadas de contaminação cruzada de estoques celulares cuja identidade era anteriormente inquestionável. A identificação de motivos comuns e incomuns pelos quais as células talvez não se desenvolvam pode aumentar a eficiência do laboratório, ampliar o rendimento de produtos celulares e garantir dados a jusante (downstream) significativos e confiáveis a partir de modelos in vitro.

Identificação errada de linhagens celulares

Estudos recentes estimam que a identificação errada pode afetar até um terço de todas as linhagens celulares em uso. Essas descobertas têm o potencial de colocar em dúvida os achados publicados sobre sistemas biológicos baseados em resultados de modelos de linhagens celulares. Os fatores que levam à identificação errada/contaminação cruzada de linhagens celulares incluem:

• Contaminação com linhagens celulares agressivas: A análise de isoenzimas demonstrou que muitas linhagens celulares apresentam uma isoforma de enzima rara também expressa pelas células HeLa. Desde então, foi demonstrado que as células HeLa são a linhagem celular invasiva mais comum em estoques de cultura.
• Práticas de documentação e identificação: Frascos, placas, criofrascos e recipientes para congelamento de culturas celulares devem ser identificados com clareza e mapas de armazenamento em nitrogênio líquido devem ser rigorosamente mantidos para refletir a adição, retirada e transferência de estoques celulares.
• Empréstimo de linhagens celulares: Compartilhar células entre laboratórios vizinhos é uma prática comum que leva a erros na identidade da linhagem celular. As linhagens celulares devem ser obtidas somente de repositórios de células conceituados, como a ECACC (European Collection of Authenticated Cell Cultures) no sistema público de saúde da Inglaterra.

Saiba as causas comuns de contaminação cruzada em linhagens celulares e como proteger seu trabalho das suas consequências.

Contaminação de culturas celulares com microrganismos

Os meios de cultura celular e as condições de incubação proporcionam o ambiente ideal para células, bem como contaminantes bacterianos, fúngicos e virais. Para aumentar a adesão diligente à técnica de cultura asséptica, as culturas devem ser examinadas regularmente em microscópio em busca de evidências de contaminantes bacterianos e fúngicos. Alguns contaminantes microbianos onipresentes passam despercebidos na inspeção visual, uma vez que se estima que 30% de todas as culturas estejam contaminadas com micoplasma. Reagentes e kits desenvolvidos para a detecção de micoplasma invisível frequentemente se baseiam na amplificação por PCR, que também pode ser usada para detectar contaminantes virais.

Saiba como manter suas culturas livres de contaminantes biológicos e químicos.

Crescimento celular insatisfatório

É frustrante quando as células na cultura parecem saudáveis, mas não atingem confluência. Quando a presença de contaminantes já foi descartada, algumas possíveis barreiras à duplicação celular normal incluem:

• Condição e qualidade dos meios de cultura/congelamento
• Qualidade e adequação dos suplementos à aplicação
• Erros de contagem celular durante o congelamento em temperatura ultrabaixa ou repicagem

Quando as células parecem viáveis, mas não se expandem, saiba o que é possível fazer para melhorar as condições de cultura para crescimento ideal antes de devolver ao nitrogênio líquido.

Desprendimento de fenótipos celulares aderentes

Células aderentes podem se desprender espontaneamente da cultura, isoladamente ou em camadas. Quando culturas aderentes não se mantêm aderidas, saiba o que deve ser verificado e como restaurar a coesão na cultura.

Aglutinação de células

Células em suspensão mimetizam as condições in vivo como singletos. Quando as células começam a se aglutinar, isso pode se dever a ácidos nucleicos pegajosos, presentes em meios quando as culturas estão sob estresse. O que está oculto nos meios que pode fazer com que as células se aglutinem? Leia mais aqui sobre como impedir a aglutinação em culturas.

Morte de células em cultura

Quando células morrem em cultura, primeiramente deve-se descartar contaminação por microrganismos. Outros fatores que podem contribuir para a saúde celular inadequada ou comportamento inconsistente com o fenótipo incluem:

• Condições de estoques congelados
• Número de repicagens/confluência excessiva das células
• Estresse ambiental
• Digestão excessiva com enzimas de dissociação

Equipamentos adequados, reagentes qualificados e protocolos de especialistas são essenciais para solucionar desfechos inesperados em cultura celular.

Precipitados em meios de cultura

Se não houver contaminação, particulados na cultura geralmente têm uma explicação inorgânica. Entenda sobre tampão equilibrado e componentes de meios e aprenda como manter os componentes de meios em suspensão.