T9935
Trypsine from bovine pancreas
essentially salt-free, lyophilized powder, ≥9,000 BAEE units/mg protein, BioReagent, suitable for cell culture
Synonyme(s) :
Serine Protease 1
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About This Item
Produits recommandés
Gamme de produits
BioReagent
Niveau de qualité
Forme
essentially salt-free, lyophilized powder
Activité spécifique
≥9,000 BAEE units/mg protein
Poids mol.
23.8 kDa
Composition
protein, ≥80%
Technique(s)
cell culture | mammalian: suitable
Solubilité
hydrochloric acid: soluble 1 mM
Température de stockage
−20°C
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Application
La trypsine de pancréas de bovin a été utilisée dans la digestion enzymatique de cellules de nucleus pulposus (NP) lors de l′isolement de cellules de NP humaines. Elle a également été employée comme réactif d′ « immunopanning » pour la purification de cellules.
Pour la digestion de peptides par la trypsine, utiliser un rapport trypsine/peptide d′environ 1/100 à 1/20. Ce produit est généralement utilisé pour détacher les cellules adhérentes d′une surface de culture. La concentration en trypsine nécessaire pour déloger les cellules de leur substrat dépend principalement du type de cellules et de l′ancienneté de la culture. La trypsine a également été utilisée pour remettre en suspension des cellules lors d′une culture cellulaire, en recherche protéomique pour la digestion de protéines et dans diverses digestions en gel. Parmi ses autres applications, on peut citer l′évaluation de la cristallisation par des techniques à base de membrane et la détermination du fait que les vitesses et les rendements de repliement des protéines peuvent être limités par la présence de pièges cinétiques.
Actions biochimiques/physiologiques
La trypsine clive les peptides du côté C-terminal des résidus de lysine et d′arginine. La vitesse d′hydrolyse de cette réaction diminue si l′un ou l′autre côté du site de clivage comporte un résidu acide, et l′hydrolyse est interrompue si un résidu de proline se trouve du côté carboxyle du site de clivage. L′activité trypsine est optimale à pH 7-9. La trypsine peut également cliver les liaisons ester et amide des dérivés synthétiques des acides aminés. De l′EDTA est ajouté aux solutions de trypsine pour servir d′agent chélateur, afin de neutraliser les ions calcium et magnésium qui dissimulent les liaisons peptidiques sur lesquelles la trypsine agit. L′élimination de ces ions augmente l′activité enzymatique.
Les inhibiteurs de protéase à sérine, notamment le DFP, la TLCK, l′APMSF, l′AEBSEF et l′aprotinine, inhibent la trypsine.
Les inhibiteurs de protéase à sérine, notamment le DFP, la TLCK, l′APMSF, l′AEBSEF et l′aprotinine, inhibent la trypsine.
Composants
La trypsine se compose d′un polypeptide à chaîne unique de 223 résidus acides aminés, produit par l′élimination de l′hexapeptide N-terminal présent sur le trypsinogène qui est clivé au niveau de la liaison peptidique Lys-Ile. La séquence d′acides aminés est réticulée par 6 ponts disulfure. Il s′agit de la forme native de la trypsine, la bêta-trypsine. La bêta-trypsine peut être autolysée, avec un clivage au niveau du résidu Lys-Ser, pour produire de l′alpha-trypsine. La trypsine fait partie de la famille des protéases à sérine.
Attention
Les solutions dans du HCl 1 mM sont stables 1 an en aliquotes stockées à -20 °C. La présence de Ca2+ réduit également l′autolyse de la trypsine par elle-même et maintient sa stabilité en solution. La trypsine retient également la majeure partie de son activité dans l′urée 2,0 M, la guanidine HCl 2,0 M ou le SDS à 0,1 % (p/v).
Définition de l'unité
Une unité de BAEE produit une A253 de 0,001 par minute à pH 7,6 et à 25 °C lorsque le BAEE est utilisé comme substrat.
Notes préparatoires
Ce produit est issu de pancréas provenant de Nouvelle-Zélande. Il est soluble dans du HCl 1 mM à 1 mg/ml.
Pour les applications impliquant de l′EDTA, il est recommandé de solubiliser la trypsine avec une solution saline tamponnée dépourvue d′ions Ca2+ ou Mg2+.
Pour les applications impliquant de l′EDTA, il est recommandé de solubiliser la trypsine avec une solution saline tamponnée dépourvue d′ions Ca2+ ou Mg2+.
Mention d'avertissement
Danger
Mentions de danger
Conseils de prudence
Classification des risques
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Organes cibles
Respiratory system
Code de la classe de stockage
11 - Combustible Solids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 1
Équipement de protection individuelle
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
Certificats d'analyse (COA)
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Protocoles
This procedure is for products with a specification for Trypsin activity using Na-Benzoyl-L-arginine ethyl ester (BAEE) as a substrate. The procedure is a continuous spectrophotometric rate determination (A253, Light path = 1 cm).
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