C7657

Collagénase from Clostridium histolyticum

Type XI, 2-5 FALGPA units/mg solid, ≥800 CDU/mg solid

• Synonyme(s) : Clostridiopeptidase A
• Numéro CAS: 9001-12-1
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-582-9
• Numéro MDL: MFCD00130830
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Source biologique: Clostridium histolyticum
• Niveau de qualité: 200
• Forme: powder
• Activité spécifique: ≥800 CDU/mg solid; 2-5 FALGPA units/mg solid
• Poids mol.: 68-130 kDa
• Solubilité: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C
• Application(s): diagnostic assay manufacturing
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

Ce produit a été utilisé pour isoler des lignées cellulaires PDAC (adénocarcinome canalaire pancréatique) et pour cultiver des fibroblastes pancréatiques.

La clostridiopeptidase A a été utilisée dans une étude cherchant à empêcher la progression des tissus nécrotiques de nouveaux-nés et pour évaluer les effets de la clostridiopeptidase A collagénase (CAC) dans un modèle d′adhérences péritonéales postopératoires chez le rat. Elle a également été employée dans une étude décrivant une méthode quantitative pour évaluer des petites quantités de collagène, reposant sur la spectrométrie de masse par MALDI-TOF (matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight) après digestion du collagène.

Actions biochimiques/physiologiques

La libération efficace de cellules à partir d'un tissu nécessite l'action de collagénases et de la protéase neutre. La collagénase est activée à l'aide de quatre atome-grammes de calcium (Ca²⁺) par mole d'enzyme. On pense que le filtrat de culture contient au moins 7 protéases différentes, de poids moléculaires allant de 68 à 130 kDa. Le pH optimal se situe entre 6,3 et 8,8. L'enzyme est typiquement utilisée pour digérer les constituants conjonctifs d'échantillons tissulaires afin de libérer des cellules individuelles. Le traitement par une collagénase peut provoquer la mort de certaines cellules. La digestion nécessite généralement des concentrations de 0,1 à 5 mg/ml. La durée de la réaction pour dissocier efficacement les cellules sans trop provoquer de mort cellulaire varie de 15 minutes à plusieurs heures. Utiliser de préférence un tampon de Krebs Ringer additionné de calcium et de BSA, et du Zn²⁺ pour l'activité. L'enzyme fait l'objet d'essais pour évaluer sa capacité à dissocier les hépatocytes, à une concentration d'environ 1 mg/ml dans un volume total de 100 ml pour chaque foie de rat.

La collagénase est activée à l′aide de quatre atome-grammes de calcium par mole d′enzyme. Elle est inhibée par l′acide éthylèneglycol-bis(bêta-aminoéthyléther)-N,N,N′,N′-tétraacétique, le bêta-mercaptoéthanol, le glutathion, l′acide thioglycolique et la 8-hydroxyquinoline.

Qualité

Présente également des activités clostripaïne, protéase neutre non spécifique et triptyque.

Définition de l'unité

Une unité de digestion de collagène (UDC) libère une quantité de peptides à partir du collagène d′un tendon d′Achille de bovin équivalant, en termes de couleur avec la méthode à la ninhydrine, à 1,0 μmole de leucine en 5 heures à pH 7,4 et à 37 °C en présence d′ions calcium. Une unité d′hydrolyse de FALGPA hydrolyse 1,0 μmole de furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala par minute à 25 °C. Une unité de protéase neutre hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole de tyrosine en 5 heures à pH 7,5 et à 37 °C. Une unité de clostripaïne hydrolyse 1,0 μmole de BAEE par minute à pH 7,6 et à 25 °C en présence de DTT.

Notes préparatoires

Une solution mère peut être préparée en dissolvant 0,05-0,1 mg/ml de collagénase dans du tampon TESCA (TES 50 mM contenant du chlorure de calcium à 0,36 mM), pH 7,4 à 37 °C.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H334
• Conseils de prudence: P261 - P284 - P501
• Classification des risques: Resp. Sens. 1
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable
• Équipement de protection individuelle: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves