MAB5266
Anticorps anti-neurofilament 200 kDa, clone N52
clone N52, Chemicon®, from mouse
Synonyme(s) :
Anti-CMT2CC, Anti-NFH
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About This Item
Code UNSPSC :
12352203
eCl@ss :
32160702
Nomenclature NACRES :
NA.41
Produits recommandés
Source biologique
mouse
Niveau de qualité
100
300
Forme d'anticorps
purified immunoglobulin
Type de produit anticorps
primary antibodies
Clone
N52, monoclonal
Espèces réactives
human, mouse, monkey, rat, pig
Fabricant/nom de marque
Chemicon®
Technique(s)
immunohistochemistry: suitable
western blot: suitable
Isotype
IgG1
Numéro d'accès NCBI
Numéro d'accès UniProt
Conditions d'expédition
wet ice
Modification post-traductionnelle de la cible
unmodified
Informations sur le gène
human ... NEFH(4744)
mouse ... Nefh(380684)
pig ... Nefh(100156492)
rat ... Nefh(24587)
rhesus monkey ... Nefh(717705)
Description générale
Les neurofilaments sont un type de filament intermédiaire qui sert d'élément majeur du cytosquelette soutenant le cytoplasme de l'axone. Ils sont les composants fibrillaires les plus abondants de l'axone, étant en moyenne 3 à 10 fois plus fréquents que les microtubules axonaux. Les neurofilaments (10 nm de diamètre) sont construits à partir de trois protofibrilles entrelacées, elles-mêmes composées de deux complexes de protofilaments tétramériques de protéines monomères. Les protéines du triplet du neurofilament (68/70, 160 et 200 kDa) sont présentes à la fois dans le système nerveux central et périphérique et sont généralement spécifiques aux neurones. La protéine NF-L de 68/70 kDa peut s'auto-assembler en une structure filamenteuse, mais les protéines NF-M de 160 kDa et NF-H de 200 kDa nécessitent la présence de la protéine NF-L de 68/70 kDa pour s'assembler. Les neuroromes, les ganglioneuromes, les gangliogliomes, les ganglioneuroblastomes et les neuroblastomes présentent une coloration positive des neurofilaments. Bien qu'ils soient généralement limités aux neurones, les neurofilaments ont été détectés dans des paragangliomes et des phéochromocytomes surrénaliens et extra-surrénaliens. Les carcinoïdes, les carcinomes neuroendocriniens de la peau et les carcinomes pulmonaires à cellules en grains d'avoine expriment également des neurofilaments. Pour plus d'informations sur les neurofilaments, voir le tableau en ligne des marqueurs spécifiques aux types cellulaires du système nerveux dans la section Support technique CHEMICON.
Spécificité
L′anticorps MAB5266 réagit avec la chaîne H phosphorylée et déphosphorylée du neurofilament de 200 kDa (NF-H) des tissus/extraits normux (Shaw, 1986). Il peut servir à détecter les cellules d′origine neuronale par immunohistochimie et western blotting. Il a été signalé que la réactivité de l′anticorps MAB5266 vis-à-vis de NF-H est bloquée dans les cellules surexprimant cdk-5 (Guidato, 1996).
Immunogène
Segment de queue carboxy-terminale de chaîne H porcine déphosphorylée par voir enzymatique.
Application
Domaine de recherche
Neurosciences
Neurosciences
L'utilisation de cet anticorps anti-neurofilament de 200 kDa, clone N52, a été validée en WB et IH pour la détection du neurofilament de 200 kDa.
Sous-domaine de recherche
Métabolisme des neurones et neurofilaments
Marqueurs neuronaux et gliaux
Métabolisme des neurones et neurofilaments
Marqueurs neuronaux et gliaux
Western blotting : 5 à 10 μg/ml
Immunohistochimie : 5 à 10 μg/ml.
Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.
Immunohistochimie : L′anticorps N52 réagit avec un fragment de bras latéral du neurofilament de 200 kDa (NF-200) qui est situé à la fin du domaine KSP MPR et qui contient le site consensus de phosphorylation de cdk-5, cependant cette réactivité disparaît si le fragment de NF-200 est phosphorylé par cdk-5 (Guidato et al, 1996). Il est donc conseillé, pour garantir une réactivité et un marquage optimaux, y compris dans les essais Western, de traiter les échantillons avec de la phosphatase alcaline avant marquage avec l′anticorps. Suggestion de protocole de traitement :
Protocole - Préparation des solutions :
I. Solution saline tamponnée au Tris (TBS) : Tris-HCl à 0,1 mol/l ; NaCl à 0,1 mol/l′, pH 8,0.
II. Mélanger de la phosphatase alcaline à 1 mg/ml avec 1 mol/l de ZnSO4, 1 mol/l de MgCl2 et 1 mmol/l de PMSF, puis dissoudre dans la solution TBS.
REMARQUE : Il est nécessaire de dialyser la phosphatase alcaline par rapport à la solution I avant utilisation.
Procédure :
Laisser sécher à l′air libre des coupes congelées issues d′échantillons de tissus congelés par un choc à ultra-basse température puis les fixer pendant 10 min avec de l′acétone à -20 °C. Laisser évaporer à température ambiante l′acétone en excès. Incuber les coupes dans de la solution II pendant 4 heures à +30 °C, puis les laver 3 fois dans de la solution TBS pendant 5 minutes à chaque fois. Incuber les coupes servant de témoin négatif dans de la solution II exempte de phosphatase alcaline. Poursuivre le traitement comme suit :
- Recouvrir la préparation avec 10-20 μl de solution d'anticorps et incuber dans une chambre humide pendant 1 heure.
- Immerger la lame dans de la solution TBS et la laver 3 fois dans de la solution TBS pendant 5 minutes à chaque fois.
- Recouvrir la préparation avec 10-20 μl d′une solution d'anticorps IgG anti-souris, marqué avec de l′isothiocyanate de fluorescéine, et incuber dans une chambre humide à 37 °C pendant 1 heure.
- Laver 3 fois la lame dans de la solution TBS pendant 5 min à chaque fois.
Immunohistochimie : 5 à 10 μg/ml.
Il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales.
Immunohistochimie : L′anticorps N52 réagit avec un fragment de bras latéral du neurofilament de 200 kDa (NF-200) qui est situé à la fin du domaine KSP MPR et qui contient le site consensus de phosphorylation de cdk-5, cependant cette réactivité disparaît si le fragment de NF-200 est phosphorylé par cdk-5 (Guidato et al, 1996). Il est donc conseillé, pour garantir une réactivité et un marquage optimaux, y compris dans les essais Western, de traiter les échantillons avec de la phosphatase alcaline avant marquage avec l′anticorps. Suggestion de protocole de traitement :
Protocole - Préparation des solutions :
I. Solution saline tamponnée au Tris (TBS) : Tris-HCl à 0,1 mol/l ; NaCl à 0,1 mol/l′, pH 8,0.
II. Mélanger de la phosphatase alcaline à 1 mg/ml avec 1 mol/l de ZnSO4, 1 mol/l de MgCl2 et 1 mmol/l de PMSF, puis dissoudre dans la solution TBS.
REMARQUE : Il est nécessaire de dialyser la phosphatase alcaline par rapport à la solution I avant utilisation.
Procédure :
Laisser sécher à l′air libre des coupes congelées issues d′échantillons de tissus congelés par un choc à ultra-basse température puis les fixer pendant 10 min avec de l′acétone à -20 °C. Laisser évaporer à température ambiante l′acétone en excès. Incuber les coupes dans de la solution II pendant 4 heures à +30 °C, puis les laver 3 fois dans de la solution TBS pendant 5 minutes à chaque fois. Incuber les coupes servant de témoin négatif dans de la solution II exempte de phosphatase alcaline. Poursuivre le traitement comme suit :
- Recouvrir la préparation avec 10-20 μl de solution d'anticorps et incuber dans une chambre humide pendant 1 heure.
- Immerger la lame dans de la solution TBS et la laver 3 fois dans de la solution TBS pendant 5 minutes à chaque fois.
- Recouvrir la préparation avec 10-20 μl d′une solution d'anticorps IgG anti-souris, marqué avec de l′isothiocyanate de fluorescéine, et incuber dans une chambre humide à 37 °C pendant 1 heure.
- Laver 3 fois la lame dans de la solution TBS pendant 5 min à chaque fois.
Forme physique
Format : purifié
Immunoglobuline purifiée (chromatographie d'échange d′ions). En solution dans du tampon phosphate 0,02 M et du NaCl 0,25 M avec 0,1 % d'azoture de sodium, à pH 7,6.
Stockage et stabilité
Conserver entre 2 et 8 °C en aliquotes non diluées pendant 6 mois maximum. Éviter les congélations/décongélations répétées.
Autres remarques
Concentration : Pour connaître la concentration spécifique du lot, veuillez vous référer au certificat d′analyse.
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Clause de non-responsabilité
Sauf indication contraire dans notre catalogue ou toute autre documentation associée au(x) produit(s), nos produits sont uniquement destinés à la recherche et ne sauraient être utilisés à d'autres fins, ce qui inclut, sans s'y limiter, les utilisations commerciales non autorisées, les utilisations diagnostiques in vitro, les utilisations thérapeutiques ex vivo ou in vivo, ou tout type de consommation ou d'application chez l'être humain ou chez l'animal.
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Réf. du produit
Description
Tarif
Code de la classe de stockage
10 - Combustible liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 2
Point d'éclair (°F)
Not applicable
Point d'éclair (°C)
Not applicable
Certificats d'analyse (COA)
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