17-10222
Biocapteur lentiviral LentiBrite EB3-RFP
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About This Item
Code UNSPSC :
12352207
eCl@ss :
34360190
Nomenclature NACRES :
NA.52
Produits recommandés
Fabricant/nom de marque
Chemicon®
LentiBrite
Niveau de qualité
Technique(s)
cell based assay: suitable
immunocytochemistry: suitable
immunofluorescence: suitable
single cell analysis: suitable
transfection: suitable
Numéro d'accès UniProt
Méthode de détection
fluorometric
Conditions d'expédition
dry ice
Informations sur le gène
human ... MAPRE3(22924)
Description générale
Lisez notre note d'application dans Nature Methods !
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
(cliquez ici !)
Découvrez les avantages de nos biocapteurs lentiviraux LentiBrite ! Cliquez ici
Les biocapteurs peuvent être utilisés pour détecter la présence ou l'absence d'une protéine donnée, ainsi que la localisation subcellulaire de cette protéine dans une cellule vivante. Les marqueurs fluorescents sont souvent utiles pour visualiser la protéine d'intérêt dans une cellule par microscopie de fluorescence ou par capture vidéo par intervalles (time-lapse). Visualiser les cellules vivantes sans les perturber permet aux chercheurs d'observer les conditions cellulaires en temps réel.
Les systèmes à vecteur lentiviral constituent un outil de recherche prisé qui permet d'introduire des produits génétiques dans les cellules. La transfection lentivirale présente certains avantages par rapport aux méthodes non virales telles que la transfection par voie chimique, notamment une plus grande efficacité de transfection des cellules en division ou non, une expression stable du transgène sur le long terme et une faible immunogénicité.
EMD Millipore présente les biocapteurs lentiviraux LentiBrite, une nouvelle gamme de particules lentivirales pré-emballées codant pour des protéines importantes et fondamentales de l'autophagie, de l'apoptose et de la structure cellulaire, pour une visualisation sous différents états cellulaires/pathologiques dans des cellules vivantes et en analyses in vitro.
Les particules lentivirales LentiBrite EB3-RFP de EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique de l'extrémité supérieure des microtubules dans des types de cellules difficiles à transfecter.
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
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Les biocapteurs peuvent être utilisés pour détecter la présence ou l'absence d'une protéine donnée, ainsi que la localisation subcellulaire de cette protéine dans une cellule vivante. Les marqueurs fluorescents sont souvent utiles pour visualiser la protéine d'intérêt dans une cellule par microscopie de fluorescence ou par capture vidéo par intervalles (time-lapse). Visualiser les cellules vivantes sans les perturber permet aux chercheurs d'observer les conditions cellulaires en temps réel.
Les systèmes à vecteur lentiviral constituent un outil de recherche prisé qui permet d'introduire des produits génétiques dans les cellules. La transfection lentivirale présente certains avantages par rapport aux méthodes non virales telles que la transfection par voie chimique, notamment une plus grande efficacité de transfection des cellules en division ou non, une expression stable du transgène sur le long terme et une faible immunogénicité.
EMD Millipore présente les biocapteurs lentiviraux LentiBrite, une nouvelle gamme de particules lentivirales pré-emballées codant pour des protéines importantes et fondamentales de l'autophagie, de l'apoptose et de la structure cellulaire, pour une visualisation sous différents états cellulaires/pathologiques dans des cellules vivantes et en analyses in vitro.
- Pré-emballés, marqués par fluorescence avec la GFP et la RFP
- Transfection à plus haute efficacité par rapport aux méthodes traditionnelles de transfection chimique et autres méthodes non virales
- Possibilité de transfecter des cellules en division, non-en division, et des types cellulaires difficiles à transfecter, tels que les cellules primaires ou les cellules souches
- Ne perturbe pas les fonctions cellulaires
Les particules lentivirales LentiBrite EB3-RFP de EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique de l'extrémité supérieure des microtubules dans des types de cellules difficiles à transfecter.
Les microtubules sont des filaments dynamiques du cytosquelette comprenant un noyau de sous-unités de tubuline flanqué de terminaisons structurellement et fonctionnellement distinctes, appelées extrémité plus et extrémité moins. L'instabilité dynamique des microtubules, avec des cycles de croissance et de décroissance, se produit aux extrémités plus et est médiée par un complexe de protéines de suivi des extrémités plus des microtubules (+TIP). Les composants clés du complexe +TIP sont les protéines de liaison aux extrémités (EB). L'imagerie de la croissance des extrémités plus dans des cellules vivantes exprimant des EB marquées avec des protéines fluorescentes a grandement contribué à mieux comprendre les agents se liant aux microtubules.
Les particules lentivirales LentiBrite EB3-RFP d'EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique des extrémités plus des microtubules dans les cellules vivantes pour les types cellulaires difficiles à transfecter.
Les particules lentivirales LentiBrite EB3-RFP d'EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique des extrémités plus des microtubules dans les cellules vivantes pour les types cellulaires difficiles à transfecter.
Application
Imagerie par microscopie de fluorescence :
Des cellules REF52 ont été déposées sur une lame compartimentée en verre et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 20 pendant 24 heures. Après remplacement du milieu et 48 heures d'incubation supplémentaires, les cellules ont été observées en temps réel par imagerie en microscopie de fluorescence à champ large en immersion dans de l'huile. La protéine EB3-RFP présente une distribution ponctuée caractéristique des extrémités des microtubules.
Comparaison immunocytochimique et analyse des inhibiteurs :
des cellules HeLa ont été déposées sur une lame compartimentée en verre et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 20 pendant 24 heures. Au bout de 24 heures, le milieu a été remplacé et les cellules ont ensuite été incubées pendant 48 heures supplémentaires. EB3-RFP présente un chevauchement presque complet avec EB3 détecté par coloration immunocytochimique avec un anticorps anti-EB3 polyclonal de lapin (EMD Millipore, réf. AB6033).
Autres types cellulaires :
les cellules MCF7 ont été soumises à une transduction avec le lentivirus EB3-RFP comme dans la Figure 1 à une MOI de 40 pendant 24 heures, puis colorées pour la tubuline. EB3-RFP présente une distribution ponctuée et linéaire courte. La coloration immunocytochimique avec un anticorps monoclonal dirigé contre la α-tubuline (EMD Millipore, réf. 05-829) révèle le motif filamenteux typique des microtubules. La superposition de EB3-RFP (rouge), de l'anti-tubuline (vert) et du DAPI (bleu) montre que EB3-RFP est localisé aux extrémités des microtubules.
Types de cellules difficiles à transfecter :
des cellules primaires de type HUVEC et des cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC) ont été déposées sur une lame à chambre de culture en verre, et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales, à des valeurs de MOI respectives de 20 et 40, pendant 24 heures.
Imagerie accélérée :
les cellules REF52 ont été déposées sur des lames compartimentées en verre et soumises à une transduction avec des particules lentivirales EB3-RFP. Les images ont été collectées toutes les 3 secondes pendant un total de 2 minutes. Voici 3 images séquentielles ; pour voir la séquence complète, veuillez consulter notre page Structure cellulaire-Biocapteurs.
Pour une visualisation optimale de la fluorescence et une analyse optimale sur cellules vivantes, il est recommandé d'analyser le niveau d'expression de la cible dans les 24 à 48 heures qui suivent la transfection/l'infection, car l'intensité de la fluorescence peut diminuer au fil du temps, en particulier dans les lignées cellulaires difficiles à transfecter. Les cellules infectées peuvent être congelées après une transfection/infection réussie, puis décongelées et mises en culture de façon à conserver leur expression fluorescente positive au-delà de 24-48 heures. La durée et l'intensité de l'expression fluorescente varient d'une lignée cellulaire à l'autre. Des valeurs de MOI plus élevées peuvent être nécessaires pour les lignées cellulaires difficiles à transfecter.
Des cellules REF52 ont été déposées sur une lame compartimentée en verre et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 20 pendant 24 heures. Après remplacement du milieu et 48 heures d'incubation supplémentaires, les cellules ont été observées en temps réel par imagerie en microscopie de fluorescence à champ large en immersion dans de l'huile. La protéine EB3-RFP présente une distribution ponctuée caractéristique des extrémités des microtubules.
Comparaison immunocytochimique et analyse des inhibiteurs :
des cellules HeLa ont été déposées sur une lame compartimentée en verre et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 20 pendant 24 heures. Au bout de 24 heures, le milieu a été remplacé et les cellules ont ensuite été incubées pendant 48 heures supplémentaires. EB3-RFP présente un chevauchement presque complet avec EB3 détecté par coloration immunocytochimique avec un anticorps anti-EB3 polyclonal de lapin (EMD Millipore, réf. AB6033).
Autres types cellulaires :
les cellules MCF7 ont été soumises à une transduction avec le lentivirus EB3-RFP comme dans la Figure 1 à une MOI de 40 pendant 24 heures, puis colorées pour la tubuline. EB3-RFP présente une distribution ponctuée et linéaire courte. La coloration immunocytochimique avec un anticorps monoclonal dirigé contre la α-tubuline (EMD Millipore, réf. 05-829) révèle le motif filamenteux typique des microtubules. La superposition de EB3-RFP (rouge), de l'anti-tubuline (vert) et du DAPI (bleu) montre que EB3-RFP est localisé aux extrémités des microtubules.
Types de cellules difficiles à transfecter :
des cellules primaires de type HUVEC et des cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC) ont été déposées sur une lame à chambre de culture en verre, et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales, à des valeurs de MOI respectives de 20 et 40, pendant 24 heures.
Imagerie accélérée :
les cellules REF52 ont été déposées sur des lames compartimentées en verre et soumises à une transduction avec des particules lentivirales EB3-RFP. Les images ont été collectées toutes les 3 secondes pendant un total de 2 minutes. Voici 3 images séquentielles ; pour voir la séquence complète, veuillez consulter notre page Structure cellulaire-Biocapteurs.
Pour une visualisation optimale de la fluorescence et une analyse optimale sur cellules vivantes, il est recommandé d'analyser le niveau d'expression de la cible dans les 24 à 48 heures qui suivent la transfection/l'infection, car l'intensité de la fluorescence peut diminuer au fil du temps, en particulier dans les lignées cellulaires difficiles à transfecter. Les cellules infectées peuvent être congelées après une transfection/infection réussie, puis décongelées et mises en culture de façon à conserver leur expression fluorescente positive au-delà de 24-48 heures. La durée et l'intensité de l'expression fluorescente varient d'une lignée cellulaire à l'autre. Des valeurs de MOI plus élevées peuvent être nécessaires pour les lignées cellulaires difficiles à transfecter.
Domaine de recherche
Structure cellulaire
Structure cellulaire
Sous-domaine de recherche
Cytosquelette
Cytosquelette
Composants
Lentivirus EB3-TagRFP :
un flacon contenant 25 µl de particules lentivirales correspondant à au moins 3 × 10e8 unités infectieuses (UI) par ml. Pour obtenir des informations sur les titres spécifiques d'un lot, veuillez consulter le paragraphe “Viral Titer (titre viral)” de la fiche technique.
Promoteur
EF-1 (facteur d'élongation 1)
Multiplicité d'infection (MOI)
MOI = Rapport entre le nombre de particules lentivirales infectieuses (IFU) et le nombre de cellules infectées.
Les valeurs de MOI typiques pour une efficacité de transduction et une intensité de signal élevées sont comprises entre 20 et 40. Pour cette cible, certains types cellulaires peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus faibles (p. ex. : HT-1080, cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC)), tandis que d'autres peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus élevées (p. ex. : cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC), U2OS, HeLa).
REMARQUE : la valeur de MOI doit être titrée et optimisée par l'utilisateur final pour chaque type cellulaire et chaque cible lentivirale afin d'atteindre l'efficacité de transduction et l'intensité du signal souhaitées.
un flacon contenant 25 µl de particules lentivirales correspondant à au moins 3 × 10e8 unités infectieuses (UI) par ml. Pour obtenir des informations sur les titres spécifiques d'un lot, veuillez consulter le paragraphe “Viral Titer (titre viral)” de la fiche technique.
Promoteur
EF-1 (facteur d'élongation 1)
Multiplicité d'infection (MOI)
MOI = Rapport entre le nombre de particules lentivirales infectieuses (IFU) et le nombre de cellules infectées.
Les valeurs de MOI typiques pour une efficacité de transduction et une intensité de signal élevées sont comprises entre 20 et 40. Pour cette cible, certains types cellulaires peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus faibles (p. ex. : HT-1080, cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC)), tandis que d'autres peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus élevées (p. ex. : cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC), U2OS, HeLa).
REMARQUE : la valeur de MOI doit être titrée et optimisée par l'utilisateur final pour chaque type cellulaire et chaque cible lentivirale afin d'atteindre l'efficacité de transduction et l'intensité du signal souhaitées.
Qualité
Évaluée par transduction de cellules HT-1080 et imagerie en fluorescence, afin d'évaluer l'efficacité de la transduction.
Forme physique
Précipitation au PEG
Stockage et stabilité
Manipulation et stockage
Stocké à -80 °C, le lentivirus est stable pendant au moins 4 mois à compter de la date de réception. Après la première décongélation, placer immédiatement sur de la glace et congeler sous forme d'aliquotes de travail à -80 °C. Les aliquotes congelées peuvent être conservées au moins 2 mois. Des congélations/décongélations supplémentaires peuvent entraîner une baisse du titre viral et de l'efficacité de la transduction.
REMARQUE IMPORTANTE CONCERNANT LA SÉCURITÉ
Les vecteurs lentiviraux à réplication défaillante, tels que le vecteur de 3e génération fourni dans ce produit, ne sont pas connus pour causer des maladies, que ce soit chez l'Homme ou chez l'animal. Cependant, les lentivirus peuvent s'intégrer dans le génome de la cellule hôte, et ainsi présenter un certain risque de mutagenèse par insertion. Ce produit fait partie du groupe de risque de niveau 2 et doit être manipulé dans un laboratoire de sécurité biologique de niveau 2 (LSB2). Une discussion détaillée sur la biosécurité des vecteurs lentiviraux est disponible sous la référence bibliographique suivante : Pauwels, K. et al. (2009). "State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations." Curr. Gene Ther. 9: 459-474
Stocké à -80 °C, le lentivirus est stable pendant au moins 4 mois à compter de la date de réception. Après la première décongélation, placer immédiatement sur de la glace et congeler sous forme d'aliquotes de travail à -80 °C. Les aliquotes congelées peuvent être conservées au moins 2 mois. Des congélations/décongélations supplémentaires peuvent entraîner une baisse du titre viral et de l'efficacité de la transduction.
REMARQUE IMPORTANTE CONCERNANT LA SÉCURITÉ
Les vecteurs lentiviraux à réplication défaillante, tels que le vecteur de 3e génération fourni dans ce produit, ne sont pas connus pour causer des maladies, que ce soit chez l'Homme ou chez l'animal. Cependant, les lentivirus peuvent s'intégrer dans le génome de la cellule hôte, et ainsi présenter un certain risque de mutagenèse par insertion. Ce produit fait partie du groupe de risque de niveau 2 et doit être manipulé dans un laboratoire de sécurité biologique de niveau 2 (LSB2). Une discussion détaillée sur la biosécurité des vecteurs lentiviraux est disponible sous la référence bibliographique suivante : Pauwels, K. et al. (2009). "State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations." Curr. Gene Ther. 9: 459-474
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Code de la classe de stockage
10 - Combustible liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 2
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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