17-10155
Biocapteur lentiviral LentiBrite Paxilline-RFP
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About This Item
Code UNSPSC :
12352207
eCl@ss :
34360190
Nomenclature NACRES :
NA.51
Produits recommandés
Description générale
Lisez notre note sur les applications dans Nature Methods !
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
(Cliquez ici !)
En savoir plus sur les avantages de nos biocapteurs lentiviraux LentiBrite ! Cliquez ici
Les biocapteurs peuvent être utilisés pour détecter la présence / l'absence d'une protéine particulière ainsi que la localisation intracellulaire de cette protéine dans une cellule à l'état vivant. Les marqueurs fluorescents sont souvent prisés comme moyen de visualiser la protéine d'intérêt dans une cellule par microscopie à fluorescence ou par capture vidéo par intervalles (time-lapse). La visualisation des cellules vivantes sans perturbation permet aux chercheurs d'observer les conditions cellulaires en temps réel.
Les systèmes à vecteur lentiviral sont un outil de recherche populaire utilisé pour introduire des produits géniques dans les cellules. La transfection lentivirale présente des avantages par rapport aux méthodes non virales comme la transfection chimique, notamment une transfection à plus haute efficacité des cellules en division et non en division, une expression stable à long terme du transgène et une immunogénicité faible.
EMD Millipore présente les biocapteurs lentiviraux LentiBrite, une nouvelle gamme de particules lentivirales pré-emballées codant pour des protéines importantes et fondamentales de l'autophagie, de l'apoptose et de la structure cellulaire, pour une visualisation sous différents états cellulaires/pathologiques dans des cellules vivantes et en analyses in vitro.
Les particules lentivirales LentiBrite Paxilline-RFP de EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique des adhésions focales sur des cellules vivantes dans des types cellulaires difficiles à transfecter.
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
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Les biocapteurs peuvent être utilisés pour détecter la présence / l'absence d'une protéine particulière ainsi que la localisation intracellulaire de cette protéine dans une cellule à l'état vivant. Les marqueurs fluorescents sont souvent prisés comme moyen de visualiser la protéine d'intérêt dans une cellule par microscopie à fluorescence ou par capture vidéo par intervalles (time-lapse). La visualisation des cellules vivantes sans perturbation permet aux chercheurs d'observer les conditions cellulaires en temps réel.
Les systèmes à vecteur lentiviral sont un outil de recherche populaire utilisé pour introduire des produits géniques dans les cellules. La transfection lentivirale présente des avantages par rapport aux méthodes non virales comme la transfection chimique, notamment une transfection à plus haute efficacité des cellules en division et non en division, une expression stable à long terme du transgène et une immunogénicité faible.
EMD Millipore présente les biocapteurs lentiviraux LentiBrite, une nouvelle gamme de particules lentivirales pré-emballées codant pour des protéines importantes et fondamentales de l'autophagie, de l'apoptose et de la structure cellulaire, pour une visualisation sous différents états cellulaires/pathologiques dans des cellules vivantes et en analyses in vitro.
- Pré-emballés, marqués par fluorescence avec la GFP et la RFP
- Transfection à plus haute efficacité par rapport aux méthodes traditionnelles de transfection chimique et autres méthodes non virales
- Possibilité de transfecter des cellules en division, non-en division, et des types cellulaires difficiles à transfecter, tels que les cellules primaires ou les cellules souches
- Ne perturbe pas les fonctions cellulaires
Les particules lentivirales LentiBrite Paxilline-RFP de EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique des adhésions focales sur des cellules vivantes dans des types cellulaires difficiles à transfecter.
Les cellules adhérentes maintiennent le contact avec le substrat extracellulaire au moyen d'adhésions focales, comprenant des récepteurs de la matrice (intégrines) transmembranaires liés de leur côté cytoplasmique à un complexe de protéines de signalisation et de structure, qui sont à leur tour liées au cytosquelette. La paxilline, l'une des premières protéines recrutées au niveau des adhésions naissantes, sert de protéine d'échafaudage pour les kinases (Src, FAK), les facteurs à échange de GTP et d'autres protéines de structure, et joue un rôle clé dans l'assemblage et le désassemblage des adhésions focales. Les adhésions focales sont des structures hautement dynamiques qui s'assemblent au niveau de l'extrémité avant de la cellule en migration et se désassemblent au niveau de l'extrémité arrière. Les fusions entre la paxilline et des protéines fluorescentes ont été largement utilisées pour l'analyse de la dynamique des adhésions focales dans les cellules vivantes.
Les particules lentivirales LentiBrite Paxilline-RFP d'EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique des adhésions focales sur cellules vivantes dans des types cellulaires difficiles à transfecter.
Les particules lentivirales LentiBrite Paxilline-RFP d'EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique des adhésions focales sur cellules vivantes dans des types cellulaires difficiles à transfecter.
Application
Imagerie par microscopie à fluorescence :
(Voir la figure 1 de la fiche technique)
Des cellules REF52 ont été déposées sur une lame à chambre de culture et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 40 pendant 24 heures. Après remplacement du milieu et 48 heures d'incubation supplémentaires, les cellules ont été fixées avec du formaldéhyde et montées sur lame. Les images ont été obtenues par microscopie à fluorescence à champ large avec immersion dans l'huile. La paxilline-RFP présente une distribution ponctuée au niveau des adhésions focales dans les cellules.
Comparaison par immunocytochimie et analyse d'inhibiteur :
(Voir la figure 2 de la fiche technique)
Comme pour la figure 1 (voir la fiche technique), des cellules HeLa ont été déposées sur une lame à chambre de culture et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 5 pendant 24 heures. Après 24 heures, le milieu a été remplacé et les cellules ont ensuite été incubées pendant 48 heures supplémentaires. La coloration immunocytochimique (vert) des mêmes champs de vision avec un anticorps monoclonal dirigé contre la paxilline (n° cat. 05-417) révèle des profils d'expression similaires à ceux de la protéine RFP (rouge).
Autres types cellulaires :
(Voir la figure 3 de la fiche technique)
Des cellules U2OS et HT1080 ont été traitées comme sur la figure 1 (voir la fiche technique), à des valeurs de MOI respectives de 5 et de 10, pendant 24 heures.
Types cellulaires difficiles à transfecter :
(Voir la figure 4 de la fiche technique)
Des cellules primaires de type HUVEC et des cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC) ont été déposées sur une lame à chambre de culture, et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales, à des valeurs de MOI respectives de 5 et de 20, pendant 24 heures.
Pour une visualisation optimale de la fluorescence et une analyse optimale sur cellules vivantes, il est recommandé d'analyser le niveau d'expression de la cible dans les 24 à 48 heures qui suivent la transfection / l'infection, car l'intensité de la fluorescence peut diminuer au fil du temps, en particulier dans les lignées cellulaires difficiles à transfecter. Les cellules infectées peuvent être congelées après une transfection/infection réussie et décongelées en culture pour conserver une expression fluorescente positive au-delà de 24 à 48 heures. La longueur et l'intensité de l'expression fluorescente varient entre les lignées cellulaires. Des valeurs de MOI plus élevées peuvent être nécessaires pour les lignées cellulaires difficiles à transfecter.
(Voir la figure 1 de la fiche technique)
Des cellules REF52 ont été déposées sur une lame à chambre de culture et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 40 pendant 24 heures. Après remplacement du milieu et 48 heures d'incubation supplémentaires, les cellules ont été fixées avec du formaldéhyde et montées sur lame. Les images ont été obtenues par microscopie à fluorescence à champ large avec immersion dans l'huile. La paxilline-RFP présente une distribution ponctuée au niveau des adhésions focales dans les cellules.
Comparaison par immunocytochimie et analyse d'inhibiteur :
(Voir la figure 2 de la fiche technique)
Comme pour la figure 1 (voir la fiche technique), des cellules HeLa ont été déposées sur une lame à chambre de culture et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 5 pendant 24 heures. Après 24 heures, le milieu a été remplacé et les cellules ont ensuite été incubées pendant 48 heures supplémentaires. La coloration immunocytochimique (vert) des mêmes champs de vision avec un anticorps monoclonal dirigé contre la paxilline (n° cat. 05-417) révèle des profils d'expression similaires à ceux de la protéine RFP (rouge).
Autres types cellulaires :
(Voir la figure 3 de la fiche technique)
Des cellules U2OS et HT1080 ont été traitées comme sur la figure 1 (voir la fiche technique), à des valeurs de MOI respectives de 5 et de 10, pendant 24 heures.
Types cellulaires difficiles à transfecter :
(Voir la figure 4 de la fiche technique)
Des cellules primaires de type HUVEC et des cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC) ont été déposées sur une lame à chambre de culture, et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales, à des valeurs de MOI respectives de 5 et de 20, pendant 24 heures.
Pour une visualisation optimale de la fluorescence et une analyse optimale sur cellules vivantes, il est recommandé d'analyser le niveau d'expression de la cible dans les 24 à 48 heures qui suivent la transfection / l'infection, car l'intensité de la fluorescence peut diminuer au fil du temps, en particulier dans les lignées cellulaires difficiles à transfecter. Les cellules infectées peuvent être congelées après une transfection/infection réussie et décongelées en culture pour conserver une expression fluorescente positive au-delà de 24 à 48 heures. La longueur et l'intensité de l'expression fluorescente varient entre les lignées cellulaires. Des valeurs de MOI plus élevées peuvent être nécessaires pour les lignées cellulaires difficiles à transfecter.
Catégorie de recherche
Structure cellulaire
Structure cellulaire
Sous-domaine de recherche
Molécules d′adhésion (CAM)
Molécules d′adhésion (CAM)
Composants
Lentivirus Paxilline-TagRFP :
Un (1) flacon contenant 25 µL de particules lentivirales à une concentration minimum de 3 x 10E8 unités infectieuses (IFU) par mL.
Pour obtenir des informations sur les titres spécifiques d'un lot, veuillez consulter “Titre viral” dans l'encart du produit ci-dessus.
Promoteur
EF-1 (facteur d'élongation 1)
Multiplicité d'infection (MOI)
MOI = Rapport entre le nombre de particules lentivirales infectieuses (IFU) et le nombre de cellules infectées.
Les valeurs de MOI typiques pour une efficacité de transduction et une intensité de signal élevées sont comprises entre 20 et 40. Pour cette cible, certains types cellulaires peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus faibles (p. ex. : HT-1080, cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC)), tandis que d'autres peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus élevées (p. ex. : cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC), U2OS, HeLa).
REMARQUE : La valeur de MOI doit être titrée et optimisée par l'utilisateur final pour chaque type cellulaire et chaque cible lentivirale afin d'atteindre l'efficacité de transduction et l'intensité du signal souhaitées.
Un (1) flacon contenant 25 µL de particules lentivirales à une concentration minimum de 3 x 10E8 unités infectieuses (IFU) par mL.
Pour obtenir des informations sur les titres spécifiques d'un lot, veuillez consulter “Titre viral” dans l'encart du produit ci-dessus.
Promoteur
EF-1 (facteur d'élongation 1)
Multiplicité d'infection (MOI)
MOI = Rapport entre le nombre de particules lentivirales infectieuses (IFU) et le nombre de cellules infectées.
Les valeurs de MOI typiques pour une efficacité de transduction et une intensité de signal élevées sont comprises entre 20 et 40. Pour cette cible, certains types cellulaires peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus faibles (p. ex. : HT-1080, cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC)), tandis que d'autres peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus élevées (p. ex. : cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC), U2OS, HeLa).
REMARQUE : La valeur de MOI doit être titrée et optimisée par l'utilisateur final pour chaque type cellulaire et chaque cible lentivirale afin d'atteindre l'efficacité de transduction et l'intensité du signal souhaitées.
Qualité
Évaluée par transduction de cellules HT-1080 et imagerie par fluorescence, réalisées pour évaluer la localisation de la cible et l'efficacité de la transduction.
Forme physique
Précipitation au PEG
Stockage et stabilité
Stockage et manipulation
Le lentivirus est stable pendant au moins 4 mois à compter de la date de réception lorsqu'il est conservé à -80 °C. Après la première décongélation, placer immédiatement sur la glace et congeler à -80 °C en plusieurs aliquotes de travail. Les aliquotes congelées peuvent être stockées pendant au moins 2 mois. Des congélations/décongélations supplémentaires peuvent entraîner une diminution du titre viral et de l'efficacité de la transduction.
REMARQUE DE SÉCURITÉ IMPORTANTE
Les vecteurs lentiviraux à réplication défaillante, tels que le vecteur de 3e génération fourni dans ce produit, ne sont pas connus pour causer des maladies, que ce soit chez l'Homme ou chez l'animal. Cependant, les lentivirus peuvent s'intégrer dans le génome de la cellule hôte, et ainsi présenter un certain risque de mutagenèse par insertion. Le matériel fait partie du groupe de risque de niveau 2 et doit être manipulé dans les conditions contrôlées d'un laboratoire de niveau de sécurité biologique 2 (LSB2). Une discussion détaillée sur la biosécurité concernant les vecteurs lentiviraux est fournie dans la référence intitulée "Vecteurs lentiviraux à la pointe de la technologie pour la recherche : évaluation des risques et recommandations en matière de biosécurité." (Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.)
Le lentivirus est stable pendant au moins 4 mois à compter de la date de réception lorsqu'il est conservé à -80 °C. Après la première décongélation, placer immédiatement sur la glace et congeler à -80 °C en plusieurs aliquotes de travail. Les aliquotes congelées peuvent être stockées pendant au moins 2 mois. Des congélations/décongélations supplémentaires peuvent entraîner une diminution du titre viral et de l'efficacité de la transduction.
REMARQUE DE SÉCURITÉ IMPORTANTE
Les vecteurs lentiviraux à réplication défaillante, tels que le vecteur de 3e génération fourni dans ce produit, ne sont pas connus pour causer des maladies, que ce soit chez l'Homme ou chez l'animal. Cependant, les lentivirus peuvent s'intégrer dans le génome de la cellule hôte, et ainsi présenter un certain risque de mutagenèse par insertion. Le matériel fait partie du groupe de risque de niveau 2 et doit être manipulé dans les conditions contrôlées d'un laboratoire de niveau de sécurité biologique 2 (LSB2). Une discussion détaillée sur la biosécurité concernant les vecteurs lentiviraux est fournie dans la référence intitulée "Vecteurs lentiviraux à la pointe de la technologie pour la recherche : évaluation des risques et recommandations en matière de biosécurité." (Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.)
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Code de la classe de stockage
10 - Combustible liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 2
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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Articles
High titer lentiviral particles including beta-actin, alpha-tubulin and vimentin used for live cell analysis of cytoskeleton structure proteins.
Notre équipe de scientifiques dispose d'une expérience dans tous les secteurs de la recherche, notamment en sciences de la vie, science des matériaux, synthèse chimique, chromatographie, analyse et dans de nombreux autres domaines..
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