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Anticorps anti-phospho-histone H3 (Thr3)

Upstate^®, from rabbit

• Synonyme(s) : H3T3P, Histone H3 (phospho T3)
• Code UNSPSC : 12352203
• eCl@ss : 32160702
• Nomenclature NACRES : NA.41

Propriétés

• Source biologique: rabbit
• Niveau de qualité: 100
• Forme d'anticorps: unpurified
• Type de produit anticorps: primary antibodies
• Clone: polyclonal
• Espèces réactives: mouse, human
• Fabricant/nom de marque: Upstate^®
• Technique(s): immunocytochemistry: suitable; inhibition assay: suitable; western blot: suitable
• Numéro d'accès NCBI: NM_003493
• Numéro d'accès UniProt: Q16695
• Conditions d'expédition: dry ice
• Modification post-traductionnelle de la cible: phosphorylation (pThr3)
• Informations sur le gène: human ... H3C1(8350)

Description

Description générale

L'histone H3.1t (UniProt : Q16695 ; également appelée H3/t, H3t, H3/g) est codée par le gène HIST3H3 (également nommé H3FT) (identifiant du gène : 8290) chez l'être humain. Les histones sont des protéines nucléaires basiques hautement conservées qui sont responsables de la structure de la chromatine sous forme de nucléosome chez les eucaryotes. Elles jouent donc un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. Deux molécules de chacune des quatre histones de cœur (H2A, H2B, H3 et H4) forment un octamère, autour duquel l'ADN est enroulé sous forme d'unités répétitives, appelées nucléosomes, limitant l'accès à l'ADN de la machinerie cellulaire qui a besoin d'ADN comme matrice. L'histone H3 comporte un domaine globulaire principal et une longue queue N-terminale qui dépasse de la structure globulaire centrale du nucléosome et peut subir différentes modifications épigénétiques affectant les processus cellulaires. La queue N-terminale des histones est sujette aux modifications post-traductionnelles telles que phosphorylation, acétylation et méthylation, qui recrutent des facteurs de régulation en aval, agissent sur la structure de la chromatine et sont des déterminants cruciaux de la transcription. L'histone H3 peut être acétylée par des histones acétyltransférases au niveau de plusieurs résidus de lysine situés dans la queue d'histone. L'acétylation est généralement associée à une activité transcriptionnelle et la méthylation des résidus de lysine et d'arginine peut avoir une action d'activation ou de répression selon le résidu qui est modifié. La triméthylation de l'histone H3 est l'une des marques épigénétiques les plus étudiées. Il a été signalé que les modifications H3K4me3 se produisent systématiquement au niveau des sites d'initiation de la transcription, et le domaine H3K4me3 est associé à une plus forte activité transcriptionnelle et à l′identité cellulaire durant le développement pré-implantation et le processus de génération des cellules souches embryonnaires à partir de la masse cellulaire interne et des cellules souches trophoblastiques à partir du trophectoderme. L'histone H3 est phosphorylée au niveau de la thréonine 4 (H3T3ph) par la protéine kinase associée à l'histone H3 (HASPIN) au cours de la prophase, et déphosphorylée pendant l'anaphase et la phosphorylation au niveau de la sérine 11 (H3S10ph) par la kinase aurora B est essentielle à la condensation chromosomique et à la progression du cycle cellulaire lors de la mitose et de la méiose. (réf. : Sharifi-Zarchi, A., et al. (2017). BMS Genomics. 18; Article 964; Liu, X., et al. (2016). Nature. 537(7621); 558-562].

Spécificité

Cet anticorps polyclonal de lapin détecte l'histone H3 phosphorylée au niveau de la thréonine 3.

Immunogène

Peptide linéaire conjugué à de la KLH correspondant à 13 acides aminés entourant la phosphothréonine 3 de l'histone H3 humaine.

Application

Tests de contrôle qualité

Produit évalué par western blotting sur des extraits acides de cellules HeLa traitées à la colcémide.Analyse par western blotting : une dilution au 1/5 000e de cet anticorps a permis de détecter la phospho-histone H3 (Thr3) dans un extrait acide de cellules HeLa traitées à la colcémide (50 ng/ml, toute une nuit), mais pas la protéine histone H3 recombinante.


Applications testéesTests d'inhibition peptidique : la détection d'une bande cible dans un extrait acide de cellules HeLa traitées à la colcémide (50 ng/ml, toute une nuit) a été empêchée par le blocage préalable d'un lot représentatif avec le phosphopeptide immunogène, mais pas avec le peptide histone H3 non phosphorylé. Analyse par immunocytochimie : une dilution au 1/500e d'un lot représentatif a permis de détecter la phospho-histone H3 (Thr3) dans des cellules NIH3T3. Remarque : il revient à l'utilisateur final de déterminer les dilutions de travail optimales, car les échantillons et les conditions expérimentales peuvent varier selon les utilisateurs.

Qualité

Produit évalué en routine par immunoblotting sur des protéines extraites en milieu acide provenant de cellules HeLa mitotiques.

Description de la cible

Poids réel (observé) : env. 17 kDa ; poids théorique (calculé) : 15,51 kDa. Des bandes non caractérisées peuvent être observées avec certains lysats.

Forme physique

Format : produit non purifié

Immunodéplétion

Sérum de lapin ayant subi une immunodéplétion et contenant 0,05 % d'azoture de sodium et 30 % de glycérol.

Stockage et stabilité

Conserver entre -10 °C et -25 °C. Recommandations relatives à la manipulation du produit : dès réception, et avant le retrait du bouchon, centrifuger le flacon et mélanger délicatement la solution. Répartir en aliquotes dans des microtubes à centrifuger et conserver ces derniers à -20 °C. Éviter les congélations/décongélations répétées, qui peuvent détériorer les IgG et nuire aux performances du produit.

Remarque sur l'analyse

Témoin
Extrait acide de cellules HeLa traitées à la colcémide

Informations légales

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Clause de non-responsabilité

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Informations sur la sécurité

• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable