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  • The ZGRF1 Helicase Promotes Recombinational Repair of Replication-Blocking DNA Damage in Human Cells.

The ZGRF1 Helicase Promotes Recombinational Repair of Replication-Blocking DNA Damage in Human Cells.

Cell reports (2020-07-09)
André Brannvoll, Xiaoyu Xue, Youngho Kwon, Smaragdi Kompocholi, Anne Katrine W Simonsen, Keerthana S Viswalingam, Leticia Gonzalez, Ian D Hickson, Vibe H Oestergaard, Hocine W Mankouri, Patrick Sung, Michael Lisby
ZUSAMMENFASSUNG

Replication-blocking DNA lesions are particularly toxic to proliferating cells because they can lead to chromosome mis-segregation if not repaired prior to mitosis. In this study, we report that ZGRF1 null cells accumulate chromosome aberrations following replication perturbation and show sensitivity to two potent replication-blocking anticancer drugs: mitomycin C and camptothecin. Moreover, ZGRF1 null cells are defective in catalyzing DNA damage-induced sister chromatid exchange despite accumulating excessive FANCD2, RAD51, and γ-H2AX foci upon induction of interstrand DNA crosslinks. Consistent with a direct role in promoting recombinational DNA repair, we show that ZGRF1 is a 5'-to-3' helicase that catalyzes D-loop dissociation and Holliday junction branch migration. Moreover, ZGRF1 physically interacts with RAD51 and stimulates strand exchange catalyzed by RAD51-RAD54. On the basis of these data, we propose that ZGRF1 promotes repair of replication-blocking DNA lesions through stimulation of homologous recombination.

MATERIALIEN
Produktnummer
Marke
Produktbeschreibung

Sigma-Aldrich
Triton X-100, for molecular biology
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Sigma-Aldrich
Duolink® In Situ PLA® Sonde Anti-Kaninchen PLUS, Affinity purified Donkey anti-Rabbit IgG (H+L)
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Sigma-Aldrich
Duolink® In Situ PLA® Sonde Anti-Maus MINUS, Affinity purified Donkey anti-Mouse IgG (H+L)
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Sigma-Aldrich
DPX-Eindeckmittel für die Histologie, slide mounting medium
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Sigma-Aldrich
Anti-phospho-Histon H2A.X (Ser139)-Antikörper, Klon JBW301, clone JBW301, Upstate®, from mouse
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Sigma-Aldrich
Monoklonale ANTI-FLAG® M2-Peroxidase (HRP) in Maus hergestellte Antikörper, clone M2, purified immunoglobulin, buffered aqueous glycerol solution
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Sigma-Aldrich
5-Brom-2′-deoxyuridin, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Thymidin, powder, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Duolink® In-situ-Detektionsreagenzien Orange
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Sigma-Aldrich
Hydroxyharnstoff, 98%, powder
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Roche
Anti-GFP, from mouse IgG1κ (clones 7.1 and 13.1)
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Sigma-Aldrich
Mitomycin C aus Streptomyces caespitosus, ≥98% (HPLC), potency: ≥970 μg per mg (USP XXIV), γ-irradiated, suitable for cell culture
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Roche
Anti-HA-Peroxidase mit hoher Affinität, from rat IgG1
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Sigma-Aldrich
Triton X-100, laboratory grade
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Sigma-Aldrich
Anti-Kaninchen-IgG-(Gesamtmolekül)-Peroxidase in Ziege hergestellte Antikörper, affinity isolated antibody, buffered aqueous solution
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Sigma-Aldrich
Piperazin, ReagentPlus®, 99%
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Millipore
Ultrafree® Zentrifugenfilter, 2 ml Probenvolumen, pore size 5.0 μm, PVDF membrane (hydrophilic)
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Sigma-Aldrich
Magnesium-methylcarbonat -Lösung, 2.0 M in DMF
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Sigma-Aldrich
Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranosid, ≥99% (TLC)
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Sigma-Aldrich
bis-Benzimid H 33258, ≥98% (HPLC and TLC)
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Sigma-Aldrich
Ureidobernsteinsäure, 98.0-102.0% (T)
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Sigma-Aldrich
8-Cyclopentyl-1,3-dimethylxanthine, ≥98% (HPLC), powder
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