Immundetektionsreagenzien & -substrate

Zugehörige Produktressourcen

Protokoll: Protein Blotting Handbook
Broschüre: Rethink Western Blotting
Artikel: Western Blotting Protocol (Immunoblotting Protocol)

Blockierungsreagenzien

Die Blockierung ungebundener Membranstellen verhindert die unspezifische Bindung von Antikörpern, die zu einem hohen Hintergrund führen kann. Herkömmliche Blocker auf Milch-, Gelatine- und anderer Proteinbasis sind für viele Blotting-Anwendungen geeignet, können aber die Empfindlichkeit reduzieren oder den Nachweis erschweren, indem sie das Signal maskieren oder den Nachweis spezifischer Zielproteine beeinträchtigen. Immobilon^® Block-Rauschunterdrückungsreagenzien umfassen proteinfreie, gebrauchsfertige Puffer, die für die Reduzierung des Hintergrunds bei der Verwendung von Chemilumineszenz-, Fluoreszenz- oder Phosphoproteinnachweis optimiert sind.

Streptavidin und Sekundärantikörperkonjugate

Moderne Immundetektionsverfahren basieren auf dem enzymgebundenen Nachweis mit Streptavidin oder Sekundärantikörpern, die kovalent an Enzyme wie Meerrettichperoxidase (HRP) oder alkalische Phosphatase (AP) gebunden sind. Das konjugierte Enzym katalysiert den Abbau spezifischer Substrate, wodurch ein Signal erzeugt wird. Für das Western Blotting steht eine Vielzahl von Streptavidin-, Protein A-, Protein G- und sekundären Antikörperkonjugaten zur Verfügung. Wir bieten auch eine große Auswahl an HRP- und AP-Substraten für den chemilumineszenten, chromogenen und chemifluoreszenten Nachweis im Western Blotting an.

CHEMILUMINESZIERENDE SUBSTRATE FÜR WESTERN BLOTTING

Immobilon^® HRP-Substrate für den Chemilumineszenznachweis bieten eine höhere Empfindlichkeit für quantitativere Blots und senken die Kosten, indem sie die Möglichkeit bieten, die Konzentration der für den Nachweis verwendeten Antikörper zu verringern. Wählen Sie aus einem Portfolio von Immobilon® Substraten mit unterschiedlichen Empfindlichkeiten in praktischen gebrauchsfertigen oder Zwei-Komponenten-Formaten, um den Nachweis für Ihre Western Blotting-Anwendung zu optimieren.

• Immobilon^® Classico, Crescendo und Forte Chemilumineszenz-Substrate umfassen eine Familie vorgemischter, gebrauchsfertiger Reagenzien für den Peroxidase-basierten Nachweis, die in einer Reihe von Empfindlichkeiten angeboten werden, um ein optimales Signal-zu-Hintergrund-Verhältnis über ein Spektrum von Zielproteinkonzentrationen sicherzustellen. Nachweisgrenzen:
  • Immobilon^® Classico: ~ 6 pg Zielprotein
  • Immobilon^® Crescendo: ~ 1-3 pg Zielprotein
  • Immobilon^® Forte: ~ 400 fg Zielprotein
    
• Immobilon^® ECL Ultra und Western Chemilumineszenz-HRP-Substrate bieten eine außergewöhnliche Empfindlichkeit und eine langanhaltende Signaldauer in Standard-Zweikomponentenformaten. Diese Formulierungen ermöglichen die Verwendung stärker verdünnter Primärantikörperlösungen für den Immunblot-Nachweis. Nachweisgrenzen:
  • Immobilon^® Western HRP-Substrat: ~ 400 fg Zielprotein
  • Immobilon^® ECL Ultra-Substrat: niedriger Femtogramm-Bereich

In Cytiva™ Amersham™ ECL-Detektionsreagenzien wird ein erweiterter Luminol-basierter HRP-Nachweis eingesetzt, wobei verschiedene Formulierungen erhältlich sind, um die unterschiedlichen Anforderungen von Western-Blotting-Anwendungen abzudecken.

• Cytiva Amersham™ ECL Western Blotting-Detektionsreagenzien werden für bestätigende Western Blotting-Anwendungen empfohlen.
• Das Cytiva Amersham™ ECL Prime Western Blotting-Detektionsreagenz ermöglicht den Nachweis sowohl von hoch- als auch von gering-abundanten Proteinen auf demselben Blot.
• Cytiva Amersham™ ECL Select Western Blotting-Detektionsreagenzien bieten auch beim Einsatz von verdünnten Primär- und Sekundärantikörpern eine hohe Sensitivität.
• Das Cytiva Amersham™ ECL Start Western Blotting-Detektionsreagenz wurde für den Chemilumineszenz-Nachweis von Proteinen mit mittlerer und hoher Expression entwickelt.

CHROMOGENE SUBSTRATE FÜR WESTERN BLOTTING

Beim chromogenen Nachweis wird ein mit Peroxidase (z. B. HRP) oder alkalischer Phosphatase (AP) konjugiertes Enzym verwendet, um eine Reaktion zu katalysieren, die zur Abscheidung einer unlöslichen farbigen Ausfällung für den Nachweis führt. Unsere chromogenen Substrate für das Western Blotting sind als Lösung, Pulver und Tabletten erhältlich und bieten flexible Möglichkeiten für die Lagerung und Verwendung.

• SIGMAFAST™ DAB-Tabletten (chromogenes HRP-Substrat) bestehen aus einem kolorimetrischen Fällungssubstrat, das bei Reaktion mit Meerrettichperoxidase eine braune Farbe erzeugt und in Wasser gelöst werden kann, um eine gebrauchsfertige gepufferte Lösung für den Blotting-Nachweis herzustellen.
• BCIP/NBT (blau/violett) und BCIP/TNBT (blau/braun) Einzelreagenz (chromogene AP-Substrate) sind hochempfindliche kolorimetrische Substrate für alkalische Phosphatase.
• TMB-verstärktes Einkomponenten HRP-Membransubstrat (chromogenes HRP-Substrat) ist ein kolorimetrisches Einkomponenten-Substrat, das ein dunkelblaues Produkt erzeugt.

Signalverstärker

• Immobilon^® Signalverstärker wurde für Western Blotting-Anwendungen entwickelt, bei denen eine geringe Signalintensität zu beobachten ist. Die Verstärkung der Antikörper-Antigen-Reaktion kann eine 2- bis 10-fache Erhöhung der Signalintensität bewirken. Immobilon^® Signalverstärker ist mit PVDF- und Nitrocellulosemembranen kompatibel und kann mit chromogenen, chemilumineszenten und fluoreszierenden Nachweisverfahren eingesetzt werden.
• Das SignalBoost™ Kit zur Verstärkung der Immunreaktion wurde entwickelt, um chemilumineszente oder kolorimetrische Zielsignale auf Nitrocellulose- oder PVDF-Membranen zu verstärken

Reagenzien und Kits zur Entfernung und Wiederverwendung

Die Reagenzien für das Entfernen und Wiederverwenden wurden speziell entwickelt, um Antikörper schnell und effektiv von Western Blots zu entfernen, ohne die immobilisierten Proteine wesentlich zu beeinträchtigen.