T4799

Trypsin aus Schweinepankreas

lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture, 1,000-2,000 BAEE units/mg solid

• Synonym(e): Cocoonase, Tryptar, Tryptase
• CAS-Nummer: 9002-07-7
• EC-Nummer: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-650-8
• MDL-Nummer: MFCD00082094
• UNSPSC-Code: 12352204
• NACRES: NA.75

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Porcine pancreas
• Qualitätsniveau: 200
• Produktlinie: BioReagent
• Form: lyophilized powder
• Spezifische Aktivität: 1,000-2,000 BAEE units/mg solid
• Mol-Gew.: 23.8 kDa
• Konzentration: 25 mg/mL
• Methode(n): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• pH-Wert: 7.6
• Versandbedingung: ambient
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Trypsin kann aufgrund seiner effektiven Aktivität und Toleranz gegenüber verschiedenen Zelltypen sowie seruminduzierter Neutralisierung zur Disaggregation von Gewebe eingesetzt werden.

Anwendung

Für den Trypsinverdau von Peptiden ein Verhältnis von ca. 1:100 bis 1:20 (Trypsin:Peptid) verwenden. Die typische Verwendung für dieses Produkt besteht im Entfernen von adhärenten Zellen von einer Kulturoberfläche. Die zum Ablösen von Zellen von ihrem Substrat erforderliche Trypsinkonzentration hängt in erster Linie vom Zelltyp und dem Alter der Kultur ab. Trypsine werden auch für die Resuspendierung von Zellen während der Zellkultur, in der Proteomikforschung für den Verdau von Proteinen und in verschiedenen In-Gel-Verdaus verwendet†. Weitere Anwendungsbereiche sind u. a. die Beurteilung der Kristallisierung mit membranbasierten Methoden und eine Studie zur Feststellung, ob Proteinfaltungsraten und Proteinausbeuten durch das Vorhandensein von sog. „kinetischen Fallen“ begrenzt werden können.

Trypsin aus Schweinepankreas wurde zum Verdau von Hühnerknochen eingesetzt. Es wurde auch zur Isolierung von Gelbkörper-Endothelzellen verwendet.

Biochem./physiol. Wirkung

Trypsin spaltet Peptide auf der C-terminalen Seite von Lysin- und Argininresten. Die Hydrolyse dieser Reaktion wird verlangsamt, wenn sich auf einer der Seiten der Spaltstelle ein Säurerest befindet, und die Hydrolyse wird beendet, wenn sich auf der Carboxylseite der Spaltstelle ein Prolinrest befindet. Der optimale pH-Wert für die Trypsinaktivität liegt zwischen 7 und 9. Trypsin kann auch zum Spalten von Ester und Amidbindungen von synthetischen Derivaten von Aminosäuren eingesetzt werden. EDTA wird Trypsinlösungen als Chelatbildner zugegeben, der Calcium- und Magnesiumionen neutralisiert, welche die Peptidbindungen verdecken, auf die sich das Trypsin auswirkt. Durch das Entfernen dieser Ionen wird die enzymatische Aktivität verstärkt.

Serinprotease-Inhibitoren, u. a. DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF und Aprotinin, hemmen Trypsin.

Komponenten

Trypsin besteht aus einem einkettigen Polypeptid mit 223 Aminosäureresten und entsteht durch die Entfernung des N-terminalen Hexapeptids des Trypsinogens, das an der Lys-lle-Peptidbindung gespalten wird. Die Aminsäuresequenz ist durch 6 Disulfidbrücken quervernetzt. Dies ist die native Form des Trypsins, das beta-Trypsin. Autolyse des beta-Trypsins führt durch Spaltung am Lys-Ser-Rest zur Bildung von alpha-Trypsin. Trypsin gehört zur Familie der Serinproteasen.

Vorsicht

Lösungen in 1 mM HCl sind in Aliquots und bei -20 °C gelagert für die Dauer von einem Jahr haltbar. Vorhandenes Ca²⁺ verringert außerdem die Selbstauflösung (Autolyse) des Trypsins und erhält seine Stabilität in Lösung. Trypsin behält auch den größten Teil seiner Aktivität in 2,0 M Harnstoff, 2,0 M Guanidin-HCl oder 0,1 % (w/v) SDS.

Einheitendefinition

Eine BAEE-Einheit erzeugt unter Verwendung von BAEE als Substrat ein ΔA₂₅₃ von 0,001 pro min bei einem pH-Wert von 7,6 und einer Temperatur von 25 °C. Eine BTEE-Einheit = 320 ATEE-Einheiten. Reaktionsvolumen = 3,2 ml (1-cm-Lichtweg).

Angaben zur Herstellung

Dieses Produkt ist ein lyophilisiertes Pulver, das in ausgeglichener Salzlösung nach Hanks in einer Konzentration von 25 mg/ml löslich ist.
Bei Anwendungen, in denen EDTA erforderlich ist, sollte Trypsin in einer gepufferten Salzlösung ohne Ca²⁺ oder Mg²⁺ aufgelöst werden.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08,GHS07
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H315,H319,H334,H335
• P-Sätze: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Gefahreneinstufungen: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Zielorgane: Respiratory system
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Persönliche Schutzausrüstung: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves