C5894

Collagenase aus Clostridium histolyticum

non-sterile; 0.2 μm filtered, Type IA-S, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid

• Synonym(e): Clostridiopeptidase A
• CAS-Nummer: 9001-12-1
• EC-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• EG-Nummer: 232-582-9
• MDL-Nummer: MFCD00130830
• UNSPSC-Code: 12352204

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 200
• Sterilität: non-sterile; 0.2 μm filtered
• Form: lyophilized powder
• Spezifische Aktivität: ≥125 CDU/mg solid; 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• Mol-Gew.: 68-130 kDa
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Anwendung

Collagenase wird bei der Präparation von Arteriengewebe zur Untersuchung von fortgeschrittenen Glycosylierungsendprodukten (AGE) verwendet. Das Enzym wird zusammen mit anderen Proteasen zur Disaggregation von menschlichem Tumorgewebe, Mäusenieren, menschlichem Hirngewebe, Lungenepithelgewebe und vielen anderen Geweben verwendet. Außerdem wird es in Leber- und Nierenperfusionsstudien, beim Pankreasverdau und bei der Isolierung von nicht-parenchymalen Leberzellen verwendet. Dieses Enzym wurde auf die Freisetzung von Hepatozyten bei einer Konzentration von ca. 1 mg/ml (in einem Gesamtvolumen von 100 ml pro Rattenleber) getestet.

Biochem./physiol. Wirkung

Eine wirkungsvolle Abgabe von Zellen aus dem Gewebe erfordert die Wirkung von Kollagenase-Enzymen und der neutralen Protease. Kollagenase wird durch vier Grammatom Calcium (Ca²⁺) pro Mol Enzym aktiviert. Es wird davon ausgegangen, dass das Kulturfiltrat mindestens 7 verschiedene Proteasen mit einem Molekulargewicht von 68 - 130 kDa enthält. Der optimale pH-Wert beträgt 6,3 - 8,8. Das Enzym wird üblicherweise zum Verdau von Bindegewebskomponenten in Gewebeproben verwendet, um einzelne Zellen freizusetzen. Die Kollagenase-Behandlung kann dazu führen, dass einige Zellen absterben. Üblicherweise werden Konzentrationen zwischen 0,1 und 5 mg/ml für den Verdau verwendet. Die Dauer der Reaktion variiert zwischen 15 Minuten und mehreren Stunden und führt zu einer zufriedenstellenden Effizienz der Zelldissoziation, ohne zu viele Zellen absterben zu lassen. Krebs-Ringer-Puffer mit Calcium und BSA wird bevorzugt und Zn²⁺ wird für die Aktivität benötigt.

Collagenase wird durch vier Grammatom Calcium pro Mol Enzym aktiviert. Sie wird durch Ethylenglycol-bis-(beta-aminoethylether)-N, N, N′,N′-tetraessigsäure, β-Mercaptoethanol, Glutathion, Thioglycolsäure und 8-Hydroxychinolin gehemmt.

Vorsicht

Bei Lieferung ist dieses Produkt für die Dauer von einem Jahr bei -20 °C haltbar. Es kommt innerhalb von 30 Tagen bei 37 °C, 50 °C und -20 °C zu keinem Verlust bei der FALGPA- oder Proteaseaktivität. Lösungen von Rohcollagenase sind stabil, wenn sie schnell in Aliquoten (10 mg/ml) eingefroren und bei -20 °C tiefgekühlt gelagert werden. Weitere Gefrier-/Auftauzyklen schädigen die Lösung. Das Produkt behält seine gesamte Aktivität über 7 Stunden, wenn es auf Eis aufbewahrt wird.

Einheitendefinition

Eine Collagen-Aufschlusseinheit (Collagen Digestion Unit, CDU) setzt Peptide aus Rinder-Achillessehnencollagen entsprechend der Ninhydrin-Anfärbung von 1,0 μmol Leucin in 5 Stunden bei pH 7,4 und 37 °C in Gegenwart von Calciumionen frei. Eine FALGPA-Hydrolyseeinheit hydrolysiert 1,0 μmol Furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala pro Minute bei 25 °C. Eine neutrale Protease-Einheit hydrolysiert die Caseinmenge, die eine Färbung entsprechend 1,0 μmol Tyrosin pro 5 Stunden bei pH 7,5 und 37 °C produziert. Eine Clostripain-Einheit hydrolysiert 1,0 μmol BAEE pro Minute bei pH 7,6 und 25 °C in Gegenwart von DTT.

Angaben zur Herstellung

Lösungen werden üblicherweise mit 1-2 mg/ml in TESCA-Puffer hergestellt (enthält 50 mM TES, 0,36 mM Calciumchlorid, pH-Wert 7,4 bei 37 °C.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H334
• P-Sätze: P261 - P284 - P501
• Gefahreneinstufungen: Resp. Sens. 1
• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves