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Pepstatin A

≥100,000 U/mg

• Empirische Formel (Hill-System): C₃₄H₆₃N₅O₉
• CAS-Nummer: 26305-03-3
• Molekulargewicht: 685.89
• Beilstein: 2201362
• EG-Nummer: 247-600-0
• MDL-Nummer: MFCD00060740
• UNSPSC-Code: 12352202
• PubChem Substanz-ID: 57652681
• NACRES: NA.77

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Streptomyces sp.
• Form: powder
• Spezifische Aktivität: ≥100,000 U/mg
• mp (Schmelzpunkt): 233 °C (dec.) (lit.)
• Löslichkeit: ethanol: soluble 1 mg/mL
• Lagertemp.: 2-8°C
• SMILES String: CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CC(C)C)C(C)C)C(C)C)[C@@H](O)CC(O)=O
• InChI: 1S/C34H63N5O9/c1-17(2)12-23(37-33(47)31(21(9)10)39-34(48)30(20(7)8)38-27(42)14-19(5)6)25(40)15-28(43)35-22(11)32(46)36-24(13-18(3)4)26(41)16-29(44)45/h17-26,30-31,40-41H,12-16H2,1-11H3,(H,35,43)(H,36,46)(H,37,47)(H,38,42)(H,39,48)(H,44,45)/t22-,23-,24-,25-,26-,30-,31-/m0/s1
• InChIKey: FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N

Beschreibung

Anwendung

Pepstatin A is suitable for use:

• in the inhibitor cocktail in fluorometric matrix metalloproteinase assay
• as a protease inhibitor during homogenization of tissue
• as a protease inhibitor during extraction of cells
• to determine the molar concentrations of cathepsin D by titration with pepstatin A
• in inhibiting cathepsin D

It can be used in conjunction with E64-d and Leupeptin A to inhibit the degradation of autophagic cargo inside autophagosomes. For this application, the working concentration is typically between 1-10 μM.

Biochem./physiol. Wirkung

Pepstatin A ist ein Inhibitor von sauren Proteasen (Aspartylpeptidasen). Mit Proteasen wie Pepsin, Renin, Cathepsin D, Chymosin des Rindes und Protease B (Aspergillus niger) bildet es einen 1:1-Komplex. Der Inhibitor ist hochgradig selektiv und hemmt nicht Thiolproteasen, neutrale Proteasen oder Serinproteasen. Auch gelöste γ-Sekretase und retrovirale Protease werden von Pepstatin A gehemmt. Es wird verwendet, um Proteasen aus verschiedenen Quellen zu charakterisieren.

Einheitendefinition

1 U entspricht der Inhibitormenge, welche die Pepsinaktivität um 1 U reduziert (1 Pepsin-U entspricht der Enzymmenge, die bei 280 nm eine Extinktionszunahme von 0.001 pro Minute bei pH 2.0 und 37°C bewirkt (Haemoglobin, Fluka^®-Nr. 51290, als Substrat, Testendvolumen: 16 ml); 10′000 Extinktions-U wie oben beschrieben, entsprechen ~1 Bergmeyer-U, wenn 1-Pepsin-U der Enzymmenge entspricht, die 1 μmol Acetyl-L-phenylalanyl-3,5-diiod-L-tyrosin pro Minute bei 2.0 und 37°C hydrolysiert

Angaben zur Herstellung

Pepstatin kann mit einer Konzentration von 1 mg/ml in 10 % (v/v) Essigsäure in Methanol (9:1 Methanol:Essigsäure) aufgelöst werden. Die Zugabe von Essigsäure kann erforderlich sein, um dieses Peptid in Methanol oder DMSO aufzulösen. Die Auflösung mit einer Konzentration von 1 bis 2 mg/ml in Ethanol ist möglich, allerdings kann für eine vollständige Auflösung Wärme erforderlich sein. Pepstatin-A-Lösungen können ohne Zerfall des Peptids bis 60 °C erhitzt werden.
Stammlösungen mit einer Konzentration von 1 mg/ml sind bei 4 °C mindestens eine Woche lang stabil. Eine 1-mM-Lösung in Methanol oder DMSO ist bei -20 °C monatelang stabil. Wenn Lösungen einen dunkleren Gelbton annehmen, findet eine Hydrolyse des Reagenz statt.
Eine Arbeitskonzentration von 1 μM ist bei Raumtemperatur mindestens einen Tag lang stabil.

Sonstige Hinweise

Strong inhibitor of acid proteases - pepsin, cathepsin D, renin

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 2
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable
• Persönliche Schutzausrüstung: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)