PWOSUP-RO

Pwo-SuperYield-DNA-Polymerase

suitable for PCR, Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR, hotstart: no, dNTPs included: no

• EC-Nummer: 2.7.7.7 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Biologische Quelle: (pyrococcus woesei)
• Qualitätsniveau: 100
• Form: liquid
• Verwendung: sufficient for ≤200 reactions (04340850001); sufficient for 200 reactions; sufficient for ≤40 reactions (04340868001); sufficient for 40 reactions
• Spezifische Aktivität: 5 U/μL
• Mol-Gew.: ~ 90 kDa
• Leistungsmerkmale: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; High Fidelity PCR; dNTPs included: no; hotstart: no
• Verpackung: pkg of 100 U (04340868001); pkg of 500 U (04340850001 [2 x 250 U])
• Hersteller/Markenname: Roche
• Konzentration: 50 U/mL
• Parameter: 72 °C optimum reaction temp.
• Methode(n): PCR: suitable
• Farbe: colorless
• Aufnahme: purified DNA
• pH-Wert: 8.0 (39 °F)
• Löslichkeit: water: miscible
• Eignung: suitable for PCR
• NCBI-Hinterlegungsnummer: AAB67984
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P61876
• Anwendung(en): life science and biopharma
• Fremdaktivität: Endonuclease 30 units, none detected; Nicking activity 30 units, none detected
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Pwo-SuperYield-DNA-Polymerase kombiniert das rekombinante Enzym Pwo-DNA-Polymerase mit einem optimierten Puffersystem. Dieses Puffersystem verbessert die enzymatischen Eigenschaften der Polymerase, was zu höheren Ausbeuten der Amplifikationsreaktion führt, ohne die Wiedergabetreue der DNA-Synthese zu verändern. Dieses Enzym liefert aufgrund seines Enzymdesigns und des optimierten Puffersystems hervorragende Ergebnisse. Es amplifiziert Fragmente bis zu 3 kb – mit einfachen Templates sind auch längere Amplikons möglich.
Pwo-SuperYield-DNA-Polymerase weist bei +100 °C eine erhöhte thermische Stabilität mit einer Halbwertszeit von mehr als 2 Stunden im Vergleich zur Taq-DNA-Polymerase mit einer Halbwertszeit von weniger als 5 Minuten bei dieser Temperatur auf.

Pwo-SuperYield-DNA-Polymerase, ursprünglich aus Pyrococcus woesei isoliert, ist eine prozessive 5′ →3′-DNA-Polymerase mit 3′ →5′-Exonuklease-Korrekturlese-Aktivität; es ist keine 5′ →3′-Exonuklease-Aktivität nachweisbar.
Das Enzym akzeptiert modifizierte Nukleotide zur effizienten Markierung von Nukleinsäuren mittels PCR.
PCR-Produkte sind glattendige Produkte, die direkt für glattendige Ligation verwendet werden können.
Bei Verwendung des mitgelieferten magnesiumhaltigen Reaktionspuffers beträgt die endgültige MgCl₂-Konzentration 1,5 mM.

Spezifität

Star-Aktivität: In Fällen, in denen eine Star-Aktivität beobachtet wird und/oder die Aktivität des Enzyms im PCR-Gemisch gering ist, muss das Amplifikationsprodukt vor dem Restriktionsenzymverdau zunächst mit dem „High Pure“-PCR-Produktreinigungs-Kit aufgereinigt werden.

Anwendung

• Pwo-SuperYield-DNA-Polymerase kombiniert das rekombinante Enzym Pwo-DNA-Polymerase mit einem neu optimierten Puffersystem. Pwo-SuperYield-DNA-Polymerase wird zur Amplifizierung von DNA eingesetzt, um das Amplifikationsprodukt zu sequenzieren oder das Produkt (z. B. für die Expression des Genprodukts) zu klonen. Aufgrund seiner hohen Wiedergabetreue ist das Enzym besonders geeignet für: High-Fidelity-PCR
• zielgerichtete Mutagenese
• Klonierungen
• Genexpressionen
• Untersuchung des allelischen Polymorphismus in einzelnen RNA-Transkripten
• Charakterisierung seltener Mutationen in Gewebe
• Charakterisierung des allelischen Stadiums einzelner Zellen oder einzelner DNA-Moleküle

Leistungsmerkmale und Vorteile

Pwo-SuperYield-DNA-Polymerase ergibt mehr High-Fidelity-PCR-Produkt. Der optimierte Puffer liefert hervorragende Ergebnisse. Amplifiziert Fragmente bis zu 3 kb. Für schwierige Templates ist eine GC-RICH-Lösung beigefügt.

• Höhere Ausbeute und 18 Mal höhere Wiedergabetreue

im Vergleich zur Taq-DNA-Polymerase.

• Hohe Leistung bei schwierigen Templates.

Die GC-RICH-Lösung ist für GC-reiche PCR.

• Weniger Arbeitsschritte beim Klonen.

Verdaus können direkt im Pwo-SuperYield-PCR-Gemisch vorgenommen werden.

Verpackung

1 Kit mit 3 Komponenten

Qualität

Jede Charge wird unter Verwendung von aktiviertem DNA getestet. Beim PCR-Test wurden λ und humangenomische DNA verwendet.

Einheitendefinition

Eine Einheit Pwo-SuperYield-DNA-Polymerase ist definiert als die Enzymmenge, die innerhalb von 30 Minuten bei +70 °C den Einbau von 10 nmol der Gesamt-Desoxynucleosidtriphosphate in säurefällbare DNA katalysiert.

Assay: Inkubationspuffer für Assay von aktivierter DNA
20 mM Tris-HCI, pH 8,8 (20 °C), 50 mM KCl, 2,5 mM MgCl₂, 10 mM 2-Mercaptoethanol, jeweils 0,2 mM dATP, dCTP, dGTP, dTTP.

Inkubationsverfahren
12,5 mg aktivierte Kälber-Thymus-DNA und 0,1 mCi [α-³²P] dCTP werden mit 0,01 bis 0,1 Einheiten Pwo-SuperYield-DNA-Polymerase in 50 μL Inkubationspuffer mit einem Paraffinöl-Overlay 30 Minuten lang bei +70 °C inkubiert. Die Menge der eingebauten dNTPs wird mithilfe von Trichloressigsäureausfällung und anschließender Szintillationszählung bestimmt.

Volumenaktivität: 5 U/μl

Sonstige Hinweise

Modifizierte Nukleotide sind Substrate
Die Pwo-DNA-Polymerase akzeptiert modifizierte Nukleotide wie zum Beispiel Digoxigenin-dUTP, Biotin-dUTP oder Fluorescein-dUTP. Deshalb können diese Nukleotide beim PCR-Test der DNA hinzugefügt werden. Diese nichtradioaktiv markierten Produkte können in vielen Anwendungen als Hybridisierungssonde eingesetzt werden.

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

Die Verwendung dieses Produkts unterliegt US-Patentansprüchen und entsprechenden Patentansprüchen außerhalb der USA. Der Erwerb dieses Produkts umfasst eine beschränkte, nicht übertragbare Immunität gegenüber Rechtsschutzverfahren gemäß den oben genannten Patentansprüchen für den ausschließlichen Gebrauch dieser Menge des Produktes für eigene interne Forschungsanwendungen des Käufers. Es wird weder ausdrücklich noch implizit oder durch Rechtsverwirkung ein Rechtsanspruch unter anderen Patentsprüchen, ein Rechtsanspruch auf die Anwendung einer patentierten Methode oder ein Rechtsanspruch zur Erbringung kommerzieller Leistungen jeglicher Art übertragen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf das Berichten der Ergebnisse aus den Aktivitäten des Käufers gegen Entgelt oder andere kommerzielle Gegenleistungen. Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke vorgesehen. Diagnostische Verwendungen nach Roche-Patentansprüchen erfordern eine gesonderte Lizenz von Roche. Weitere Informationen zum Erwerb von Lizenzen erhalten Sie durch Kontaktaufnahme mit dem Direktor der Lizenzierungsabteilung, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.</ br>HINWEIS AN DEN KÄUFER: BESCHRÄNKTE LIZENZ<br />Die Verwendung dieses Produkts unterliegt dem US-Patent Nr. 6,127,155 und den entsprechenden Patentansprüchen außerhalb der USA.  Der Erwerb dieses Produkts umfasst eine beschränkte, nicht übertragbare Immunität gegenüber Rechtsschutzverfahren gemäß den oben genannten Patentansprüchen für den ausschließlichen Gebrauch dieser Menge des Produktes für eigene interne Forschungsanwendungen des Käufers.  Es wird weder ausdrücklich noch implizit oder durch Rechtsverwirkung ein Rechtsanspruch unter anderen Patentsprüchen, ein Rechtsanspruch zur Erbringung kommerzieller Leistungen jeglicher Art übertragen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf, das Berichten der Ergebnisse aus den Aktivitäten des Käufers gegen Entgelt oder andere kommerzielle Gegenleistungen.  Dieses Produkt ist nur für Forschungszwecke vorgesehen. Human- oder veterinärdiagnostische Verwendungen nach Roche-Patentansprüchen erfordern eine gesonderte Lizenz von Roche.  Alle anderen Verwendungen, die keine interne Forschung und keine human- und veterinärdiagnostischen Verwendungen nach Roche-Patentansprüchen sind, erfordern eine gesonderte Lizenz von Thermo Fisher Scientific. Weitergehende Informationen zum Erwerb von Lizenzen von Roche erhalten Sie von der Lizenzabteilung von Roche Molecular Systems, Inc., 4300 Hacienda Drive, Pleasanton, California 94588, USA, oder Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Straße 116, 68305 Mannheim, Deutschland.  Weitere Informationen zum Erwerb von Lizenzen von Thermo Fisher Scientific erhalten Sie von der Lizenzabteilung von  Thermo Fisher Scientific, 5791 Van Allen Way, Carlsbad, California 92008, USA.

Nur Kit-Komponenten

• Pwo SuperYield DNA Polymerase 5 U/μl
• PCR buffer, containing 15 mM MgSO₄ 10x concentrated
• GC-RICH Solution 5x concentrated

Sicherheitshinweise

• H-Sätze: H412
• P-Sätze: P273 - P501
• Gefahreneinstufungen: Aquatic Chronic 3
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 2
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash