SCR550

Simplicon^® RNA-Reprogrammierungskit (OKSG)

• Synonym(e): RNA Kit, RNA Reprogramming Kit, Simplicon OKSG Kit
• UNSPSC-Code: 12352207
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.75

Eigenschaften

• Methode(n): cell culture | stem cell: suitable
• Qualitätsniveau: 100
• Aufnahme: sample type induced pluripotent stem cell(s)
• Versandbedingung: dry ice

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Es wurden verschiedenste Methoden entwickelt, um mithilfe von Viren, DNA, RNA, miRNA und Proteinen integrationsfreie induzierte pluripotente Stammzellen herzustellen. Nachteile von bestehenden Methoden sind: (1) geringe Reprogrammierungseffizienz (d. h. DNA und Protein), (2) Erfordernis langwieriger Schritte für negative Selektion und Subklonierung zum Entfernen hartnäckiger Spuren des Virus (d. h. Sendai-Virus)1 und (3) tägliche Transfektionen von vier in vitro erzeugten mRNAs über einen Zeitraum von 14 Tagen (d. h. mRNA-basiert)2.

Das Simplicon RNA-Reprogrammierungskit von EMD Millipore bietet eine sichere und effiziente Methode, integrationsfreie und virenfreie menschliche iPS-Zellen mit einem einzigen Transfektionsschritt zu erzeugen. Das Verfahren basiert auf einer positivsträngigen, einsträngigen RNA-Spezies, die von einem nicht-infektiösen (nicht-verpackenden), selbstreplizierenden Virus der Venezolanischen Pferdeenzephalitis (VEE, Venezuelan Equine Encephalitis) abgeleitet ist.3 Das Simplicon RNA-Replikon ist eine synthetische, in vitro transkribierte RNA, die alle vier reprogrammierenden Faktoren (OKS-iG; Oct4, Klf4, Sox2 und Glis1) in einem polycistronischen Transkript exprimiert, das sich für eine begrenzte Anzahl von Zellteilungen selbst replizieren kann.

Siehe Anwendungshinweis (siehe Daten).

Anwendung

Das Simplicon RNA-Reprogrammierungskit von EMD Millipore bietet eine sichere und effiziente Methode, mit einem einzigen Transfektionsschritt selbst-replizierender synthetischer RNA für Oct4, Klf4, Sox2 und Glis1 integrationsfreie und virenfreie menschliche iPS-Zellen zu erzeugen.

Forschungskategorie
Stammzellenforschung

Vorteile des Simplicon RNA-Reprogrammierungskit:

• Integrationsfreie, footprint-freie iPS-Zellen. Kein Risiko einer genomischen Integration
• Sicheres, virusfreies, synthetisches polycistronisches RNA-Replikon (alle vier Reprogrammierungsfaktoren in 1 RNA-Strang)
•Nur 1-tägige Transfektion erforderlich. Das RNA-Replikon ist zur Selbstreplikation in der Lage, was arbeitsintensive, über einen Zeitraum von 14 Tagen täglich durchzuführende Transfektionen mehrerer einzelner mRNAs überflüssig macht.
• Effiziente und rasche Reprogrammierung:
• Kein Screening erforderlich, um virale Überreste auszuschließen
• Kontrollierte Eliminierung des synthetischen RNA-Replikons durch Entfernen des B18R-Proteins.
• Validiert auf Reprogrammierung unter Kulturbedingungen mit und ohne Feeder-Zellen.

Komponenten

1. VEE-OKS-iG RNA: (Artikel-Nr. CS210583) Ein (1) Fläschchen mit 10 µl RNA (1 μg/ul). Bei -80 °C aufbewahren.

2. B18R RNA: (Artikel-Nr. CS210584) Ein (1) Fläschchen mit 10 µl RNA (1 μg/ul). Bei -80 °C aufbewahren.

3. Rekombinantes B18R-Protein vom Menschen, trägerfrei: (Artikel-Nr. GF156) Ein (1) Fläschchen mit 50 μg B18R-Stammlösung zu 0,5 mg/ml. Bei -80 °C aufbewahren.

4. Booster-Zusatz II für die Reprogrammierung menschlicher iPS-Zellen: (Artikel-Nr. SCM094). Bei -20 °C aufbewahren.

Qualität

Die Erzeugung von iPS-Zellen aus p6-Fibroblasten aus menschlicher Vorhaut wurde mittels Testung bestätigt. Andere Zelltypen wurden nicht getestet, daher können ähnliche Ergebnisse nicht garantiert werden.

Lagerung und Haltbarkeit

• VEE-OKS-iG- und B18R-RNA: Bei Lagerung bei rund -80 °C ab Empfangsdatum 4 Monate haltbar. Für optimale Wiederfindung das Fläschchen vor dem Öffnen rasch zentrifugieren. Auf Eis auftauen. Auf Eis in sterile, nukleasefreie Eppendorf-Röhrchen aliquotieren und bei -80 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-Auftau-Zyklen beschränken. In einer sterilen, RNAse-freien Umgebung verwenden.

• Rekombinantes B18R-Protein vom Menschen: Bei Lagerung bei rund -80 °C ab Empfangsdatum 4 Monate haltbar. Für optimale Wiederfindung das Fläschchen vor dem Öffnen rasch zentrifugieren. Auf Eis auftauen. Das B18R-Protein auf Eis in sterile, nukleasefreie Eppendorf-Röhrchen mit geringer Proteinbindung aliquotieren und bei -80 °C aufbewahren. Das B18R-Protein muss auf Eis gehalten werden, um eine Zersetzung zu vermeiden. Wiederholte Einfrier-Auftau-Zyklen beschränken. In einer sterilen, RNAse-freien Umgebung verwenden.

• Booster-Zusatz II für die Reprogrammierung menschlicher iPS-Zellen: Bei -20 ˚C 4 Monate ab Empfangsdatum haltbar. Nach dem ersten Auftauen in Aliquote aufteilen und bei -20 °C einfrieren. Nach Hinzufügen der kleinen Molekülbestandteile zum Medium das angereicherte Medium mit einer 0,22-μM-Filtereinheit filtern und bei 2–8 ˚C lagern. Für optimale Ergebnisse ein ausreichend angereichertes Medium herstellen, um einen 1-Wochen-Vorrat für Medienwechsel zu erhalten.

Rechtliche Hinweise

SIMPLICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10-13 - German Storage Class 10 to 13