ABE290

Anti-TET3

from rabbit, purified by affinity chromatography

• Synonym(e): Methylcytosine dioxygenase TET3
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rabbit
• Qualitätsniveau: 100
• Antikörperform: affinity isolated antibody
• Antikörper-Produkttyp: primary antibodies
• Klon: polyclonal
• Aufgereinigt durch: affinity chromatography
• Speziesreaktivität: mouse
• Speziesreaktivität (Voraussage durch Homologie): human (based on 100% sequence homology), rat (based on 100% sequence homology), nonhuman primates (based on 100% sequence homology)
• Methode(n): ChIP: suitable (ChIP-seq); immunocytochemistry: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_001274420
• UniProt-Hinterlegungsnummer: O43151
• Versandbedingung: ambient
• Posttranslationale Modifikation Target: unmodified
• Angaben zum Gen: human ... TET3(200424)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

MABE1144/1132/1133 Die Methylcytosin-Dioxygenase TET3 (EC 1.14.11.n2; UniProt O43151) wird beim Menschen durch das Gen TET3 (auch bekannt als KIAA0401) kodiert (Gen-ID: 200424). TET-Proteine (TET1, TET2 und TET3) oxidieren 5-Methylcytosin (5mC) zu 5-Hydroxymethylcytosin (5hmC), 5-Formylcytosin (5fC) und 5-Carboxylcytosin (5caC) und stellen damit ein Mittel zur aktiven epigenetischen DNA-Demethylierung in Säugetieren bereit. TET-Proteine verändern auch genomische Thyminreste zu 5-Hydroxyuracil. Die Aktivität der TET-Proteine hängt von Fe(II) und 2-Oxoglutarat als Cofaktoren ab, und 2-Oxoglutarat hemmt bekanntermaßen ihre Aktivität, während Ascorbat nachweislich die TET-vermittelte Cytosinoxidation stimuliert. Darüber hinaus spielen auch posttranslationale Modifikationen (PTMs) wie Phosphorylierung und O-GlcNAcylierung eine Rolle bei der Regulierung der Aktivität von TET-Proteinen. TET1 und TET2 werden in embryonalen Stammzellen der Maus (mESCs) stark exprimiert, und es ist bekannt, dass TET3 in Eizellen hochreguliert wird und die zum Schweigen gebrachte väterliche pronukleare DNA oxidiert. Es wird auch über hohe Konzentrationen von TET-Proteinen und genomischem 5-Hydroxymethylcytosin in neuronalen Geweben berichtet. Drei gespleißte Isoformen/Varianten von TET3 sind bekannt: die lange Isoform Tet3FL und die kurze Isoform Tet3s werden während der Differenzierung embryonaler Stammzellen (ESC) in Richtung der neuronalen Linie hochreguliert, während Tet3o oozytenspezifisch ist und weder in ESCs noch in anderen getesteten Zelltypen oder Geweben erwachsener Mäuse nachgewiesen werden kann, was auf eine Rolle von Tet3o bei der väterlichen Genomoxidation in Maus-Zygoten hindeutet. Tet3FL und Tet3o enthalten die gesamte Tet3s-Sequenz mit einer zusätzlichen (aber anderen) N-terminalen Sequenz. Nur Tet3FL enthält eine N-terminale CXXC-Domäne, die an unmethylierte CpGs bindet und die höchste Affinität zu 5caC aufweist. Tet3FL ist wesentlich weniger aktiv als Tet3o und Tet3s, was darauf schließen lässt, dass die CXXC-Domäne die 5mC-Oxidationskapazität von Tet3FL einschränkt.

Spezifität

Die Immunogensequenz ist in den TET3-Isoformen Tet3FL, Tet3s und den gespleißten Tet3o-Isoformen vorhanden, wie von Jin, S.G., et al. (2016) berichtet. Cell Rep. 14(3): 493-505), sowie alle weiteren von UniProt gemeldeten gespleißten Isoformen von TET3 beim Menschen und bei der Maus (O43151, Q8BG87). Beachten Sie, dass die UniProt-Isoform 1 (O43151-1/Mensch und Q8BG87-1/Maus) der Isoform Tet3s entspricht, nicht Tet3FL (NM_001287491.1/Mensch und JX946278.1/Maus).

Immunogen

KLH-konjugiertes lineares Peptid, das mit einer internen Sequenz in der N-terminalen Hälfte von menschlichem TET3 korrespondiert.

Anwendung

Analyse mittels Immunpräzipitation: 10 µg aus einer repräsentativen Charge immunpräzipitierte das exogen exprimierte Maus-TET3-GFP-Fusionsprotein aus 500 µg Lysat von transfizierten embryonalen Stammzellen der Maus (mESCs).

Analyse mittels Chromatin-Immunpräzipitation-Sequenzierung (ChIP-seq): Eine repräsentative Charge wies TET3-Chromosomenanreicherungsstellen durch ChIP-seq-Analyse (10 µg pro ChIP) nach unter Verwendung von Chromatinpräparaten aus embryonalen Stammzellen der Maus (mESCs), die zur Überexpression von Maus-TET3 transfiziert wurden (mit freundlicher Genehmigung des Reik-Labors, Epigenetics ISP, Babraham Institute, UK).

Immunzytochemische Analyse: Eine 1:250-Verdünnung aus einer repräsentativen Charge immungefärbter 4 % Paraformaldehyd-fixierter, 0,5 % Triton X-100-permeabilisierter embryonaler Stammzellen der Maus (mESCs), die zur Überexpression der Maus-TET3-Isoform Tet3o transfiziert wurden (mit freundlicher Genehmigung des Reik-Labors, Epigenetics ISP, Babraham Institute, UK).

Immunzytochemische Analyse: Eine 1:250-Verdünnung aus einer repräsentativen Charge wies die Immunreaktivität der TET3-Isoform Tet3o in 4 % Paraformaldehyd-fixierten, mit 0,5 % Triton X-100 permeabilisierten Maus-Zygoten nach (mit freundlicher Genehmigung des Reik-Labors, Epigenetics ISP, Babraham Institute, UK).

Analyse der Immunpräzipitation: 10 µg aus einer repräsentativen Charge co-immunpräzipitierten endogenen OGT mit dem exogen überexprimierten Maus-TET3 aus transfizierten embryonalen Stammzellen der Maus (mESCs) mittels RIME (Rapid Immunoprecipitation Mass spectrometry of Endogenous proteins) (mit freundlicher Genehmigung des Reik-Labors, Epigenetics ISP, Babraham Institute, UK).

Anti-TET3, Best.-Nr. ABE290, ist ein hochspezifischer polyklonaler Kaninchen-Antikörper, der auf die Methylcytosin-Dioxygenase TET3 abzielt und in Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP), ChIP-seq, Immunzytochemie, Immunpräzipitation und Western Blotting getestet wurde.

Qualität

Beurteilt mittels Western Blot der Maus-TET3-GFP-Fusion.

Western-Blot-Analyse: 2 µg/ml dieses Antikörpers wiesen das exogen exprimierte Maus-TET3-GFP-Fusionsprotein in 10 µg Lysat von transfizierten embryonalen Stammzellen der Maus (mESCs) nach.

Zielbeschreibung

193,7/179,4 kDa (menschliche Isoform Tet3FL/Tet3s), 194,8/180,4/185,1 kDa (Maus-Isoform Tet3FL/Tet3s/Tet3o), 166,7/77,47 kDa (UniProt menschliche Isoform 2/3), 76,26 kDa (UniProt Maus-Isoform 2) berechnet. Beachten Sie, dass die UniProt-Isoform 1 (O43151-1/Mensch und Q8BG87-1/Maus) der Isoform Tet3s entspricht, nicht Tet3FL (NM_001287491.1/Mensch und JX946278.1/Maus).

Lagerung und Haltbarkeit

Bei 2–8 °C ab Empfangsdatum 1 Monat haltbar.

Sonstige Hinweise

Konzentration: Die Konzentration entnehmen Sie bitte dem chargenspezifischen Datenblatt.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable