71205-M

Benzonase^® Nuklease HC, Reinheit > 90 %

• Synonym(e): Endonuclease aus Serratia marcescens
• CAS-Nummer: 9025-65-4
• EC-Nummer: 3.1.30.2 (BRENDA, IUBMB)
• MDL-Nummer: MFCD00131010
• UNSPSC-Code: 12352202

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Serratia marcescens
• Qualitätsniveau: 200
• Rekombinant: expressed in E. coli
• Assay: >90% (SDS-PAGE)
• Form: buffered aqueous glycerol solution
• Hersteller/Markenname: Novagen^®
• Lagerbedingungen: OK to freeze
• Konzentration: ≥250 units/μL
• Anwendung(en): research use
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Benzonase^® Nuklease ist eine gentechnisch veränderte Endonuklease aus Serratia marcescens. Sie baut alle DNA- und RNA-Formen (einzelsträngig, doppelsträngig, linear und zirkulär) ohne proteolytische Aktivität ab. Sie ist über ein breites Spektrum von Bedingungen wirksam und weist eine außerordentlich hohe spezifische Aktivität auf. Das Enzym baut die Nukleinsäuren vollständig zu 5′-Monophosphat-terminierten Oligonukleotiden mit einer Länge von 2 bis 5 Basen ab (unter der Hybridisierungsgrenze), was ideal für das Entfernen von Nukleinsäuren aus rekombinanten Proteinen ist, wodurch die Einhaltung der FDA-Richtlinien für die Nukleinsäurenkontaminierung ermöglicht wird. Die Fähigkeit von Benzonase Nukleinsäuren schnell zu hydrolysieren, macht das Enzym zu einer ausgezeichneten Wahl für die Verringerung der Viskosität, um die Verarbeitungszeit zu verkürzen und die Ausbeuten von Proteinen zu steigern. Das Enzym ist beispielsweise mit BugBuster^® und PopCulture^® Proteinextraktionsreagenzien kompatibel und kann daher zusammen mit diesen Reagenzien zugegeben werden, um bei E. coli-Extrakten die Viskosität zu eliminieren und Nukleinsäuren zu entfernen.

Das Enzym besteht aus zwei Untereinheiten von je 30 kDa. Es ist zwischen pH-Wert 6 und 10 und von 0–42 °C funktionsfähig und erfordert 1–2 mmol/l Mg²⁺ zur Aktivierung. Das Enzym ist auch in Gegenwart von ionischen und nichtionischen Detergenzien, Reduktionsmitteln, PMSF (1 mmol/l), EDTA (1 mmol/l) und Harnstoff aktiv (die relative Aktivität ist von den speziellen Bedingungen abhängig). Die Aktivität wird durch >150 mmol/l monovalente Kationen, >100 mmol/l Phosphat, >100 mmol/l Ammoniumsulfat oder >100 mmol/l Guanidin-HCl gehemmt.

Benzonase-Nuklease ist in den Qualitätsstufen reinst (>99 % mittels SDS-PAGE) und rein (>90 %) in einer Standardkonzentration von 25–29 E/μl und in einer hohen Konzentration (HC) von 250 E/μl erhältlich. Beide Zubereitungen sind frei von nachweisbaren Proteasen und weisen eine spezifische Aktivität von > 1 × 10⁶ E/mg Protein auf. Der > 99%ige Reinheitsgrad wird auf Endotoxine getestet und enthält < 0,25 EE/1000 Einheiten. Dieses Produkt wird als eine durch 0,2 μm filtrierte Lösung in 50%igem Glycerin geliefert. Bei -20 °C aufbewahren

Gesamtendotoxin: < 0.25 EU/1,000 units. Purity : > 90 % mittels SDS-PAGE.

Anwendung

Entfernung von Nukleinsäure in Proteinproben

Biochem./physiol. Wirkung

Verdaut native oder hitzedenaturierte DNA und RNA.

Warnhinweis

Toxizität: Standard-Handhabung

Einheitendefinition

Eine Einheit ist definiert als die Menge von Enzym, die einen A²⁶⁰ von 1,0 in 30 Minuten verursacht, was einem vollständigen Aufschluss von 37 μg DNA entspricht.

Rechtliche Hinweise

BUGBUSTER is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

NOVAGEN is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

POPCULTURE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 2