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ChIPAb+-Dimethyl-Histon H3 (Lys9) – durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

serum, from rabbit

• Synonym(e): H3K9me2, Histone H3 (di methyl K9), Histone H3K9me2
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.52

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rabbit
• Qualitätsniveau: 100
• Antikörperform: serum
• Klon: polyclonal
• Speziesreaktivität: human, mouse
• Speziesreaktivität (Voraussage durch Homologie): mammals
• Hersteller/Markenname: ChIPAb+; Upstate^®
• Methode(n): ChIP: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NM_003493
• UniProt-Hinterlegungsnummer: Q66I33
• Versandbedingung: dry ice
• Angaben zum Gen: human ... H3F3B(3021)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in ihrem Chromatin-Kontext nutzen. Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten.
Das ChIPAb+-Dimethyl-Histon-H3(Lys9)-Set enthält den Anti-Dimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper, einen Antikörper für die Negativkontrolle (normales Kaninchenserum) und qPCR-Primer, die eine 110-Basenpaare-Region innerhalb des Promotors des humanem β-Globin-Gens amplifizieren. Das Dimethyl-Histon H3 (Lys9) und die Antikörper für die Negativkontrolle werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von Dimethyl-Histon-H3(Lys9)-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.

Die Methylierung von Histonen kann an zwei verschiedenen Resten erfolgen: Arginin oder Lysin. Die Histon-Methylierung kann, abhängig vom methylierten Rest, mit einer Transkriptionsaktivierung oder -unterdrückung in Zusammenhang stehen. Lysin 9 von Histon H3 kann durch verschiedene Histon-Methyltransferasen (HMT) wie SuvH39H1 oder G9a mono-, di- oder trimethyliert werden. Dieses methylierte Lysin kann durch Histon-Demethylasen wie JMJD1A, LSD1 oder JMJD2C demethyliert werden. Die Methylierung dieses Rests ist primär mit der Transkriptionsunterdrückung assoziiert.

Spezifität

Dimethyl-Histon H3 (Lys9)

Immunogen

Dimethyl-Histon-H3(Lys9)-Kaninchenserum wurde gegen ein an KLH-konjugiertes, verzweigtes synthetisches Peptid entwickelt, das die Sequenz ..Rme2KSTG.. enthält, in der me2K dem Dimethyl-Lysin an Rest 9 des menschlichen Histons H3 entspricht.

Epitop: Dimethyl-Lys9

Anwendung

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus unbehandelten HeLa-Zellen (1 x 10⁶ Zelläquivalente) wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μl von entweder normalem Kaninchen-Antiserum oder Anti-Dimethyl-Histon-H3(Lys9)-Serum und dem Magna ChIP A Kit (Art.- Nr. 17-610) unterzogen. (Siehe Abbildungen) Die erfolgreiche Immunpräzipitation von mit Dimethyl-Histon H3 (Lys9) assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit β-Globin-ChIP-Primern, die den humanen β-Globin-Promotor flankieren, oder mit Primern, die den humanen GAPDH-Promotor, der in HeLa-Zellen transkriptionell inaktiv ist, amplifizieren, verifiziert. Die prozentuale Eingabe relativ zu den Standardkurven für jedes qPCR-Primer-Set ist dargestellt.
Bitte beziehen Sie sich auf das Protokoll EZ-Magna A ChIP (Art.- Nr. 17-408) oder EZ-ChIP (Art.- Nr. 17-371) für experimentelle Details.

Western-Blot-Analyse und Peptidhemmung:
HeLa-Säureextrakt wurde aufgetrennt durch Elektrophorese, zu Nitrocellulose transferiert und mit Anti-Dimethyl-Histon H3 (Lys9) getestet (1:500, Bahn 1) oder mit 0,4 μM Histon H3-Peptid mit folgenden Modifikationen vorinkubiert:
Bahn 2: Linear, nicht modifiziert
Bahn 3: Verzweigt, nicht modifiziert
Bahn 4: Verzweigtes Trimethyl
Bahn 5: Lineares Trimethyl
Bahn 6: Verzweigtes Dimethyl
Bahn 7: Lineares Dimethyl
Bahn 8: Verzweigtes Monomethyl
Bahn 9: Lineares Monomethyl
Die Proteine wurden mit einem an HRP konjugierten Anti–Kaninchen-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem visualisiert.

Durch ChIP validiertes Dimethyl-Histon-H3(Lys9)-Antikörper- und Primer-Set, einschließlich Antikörper in ChIP-Qualität und spezifische Kontroll-PCR-Primer für die Chromatin-Immunpräzipitation von H3K9Me2.

Forschungskategorie
Epigenetik und Zellkernfunktion

Forschungsunterkategorie
Chromatin-Biologie

Verpackung

25 Assays je Kit, ~4 μl je Chromatin-Immunpräzipitation

Komponenten

Anti-Dimethyl-Histon H3 (Lys9) (Kaninchenserum), 1 Fläschchen

Negatives ChIP-Kontrollserum, 1 Fläschchen

ChIP-Primer β-globin, 1 Fläschchen

Qualität

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus unbehandelten HeLa-Zellen (1 x 10⁶ Zelläquivalente) wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 μl normalem Kaninchen-Antiserum oder 4 μl Anti-Dimethyl-Histon-H3(Lys9)-Serum und dem Magna ChIP A Kit (Art.- Nr. 17-610) unterzogen.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation von mit Dimethyl-Histon H3 (Lys9) assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Kontrollprimern, die den humanen β-Globin-Promotor flankieren, verifiziert (siehe Abbildungen).

Zielbeschreibung

17 kDa

Physikalische Form

Dimethyl-Histon H3 (Lys9) (polyklonales Kaninchenserum). Ein Fläschchen mit 100 μl Antiserum mit 0,05 % Natriumazid.

Normales Kaninchenserum. Ein Fläschchen mit 100 µl Antiserum mit 0,05 % Natriumazid.

ChIP-Primer, β-Globin. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μM jedes spezifischen Primers für humanes β-Globin.
FÜR: AGG ACA GGT ACG GCT GTC ATC
REV: TTT ATG CCC AGC CCT GGC TC

Lagerung und Haltbarkeit

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar.

Hinweis zur Analyse

Kontrolle
Einschließlich normales Kaninchenserum als Antikörper für die Negativkontrolle und für den humanen β-Globin-Promotor spezifische Primer.

Rechtliche Hinweise

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

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