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ChIPAb+ NFκB p65 (RelA) - durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

from mouse

• Synonym(e): Transcription factor p65, Nuclear factor NF-kappa-B p65 subunit, Nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells 3
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: mouse
• Qualitätsniveau: 100
• Klon: monoclonal
• Speziesreaktivität: rat, human
• Speziesreaktivität (Voraussage durch Homologie): mouse
• Hersteller/Markenname: ChIPAb+; Upstate^®
• Methode(n): ChIP: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• Isotyp: IgG3
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_068810.3
• UniProt-Hinterlegungsnummer: Q04206
• Versandbedingung: dry ice

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in Ihrem Chromatin-Kontext nutzen. Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten.
Das ChIPAb+-NF-κB-p65(RelA)-Set enthält den NF-κB-p65(RelA)-Antikörper, normales Maus-IgG als Negativkontrolle und qPCR-Primer, die eine 299-bp-Region des humanen IκBα-Promotors amplifizieren. NF-κB p65 (RelA) und die Negativkontrollen werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von NF-κB-p65 (RelA)-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.

Der Transkriptionsfaktor NF-kappaB (nuclear factor kappa B) ist an der Expression und Regulation einer Reihe wichtiger zellulärer und physiologischer Abläufe, z. B. Wachstum, Entwicklung, Apoptose, Immun- und Entzündungsreaktion, sowie der Aktivierung verschiedener Virus-Promotoren beteiligt, einschließlich long terminal repeats von humanem Immundefizienz-Virus. NFkappaB repräsentiert eine Gruppe von strukturell miteinander verwandten und evolutionär konservierten Proteinen, die mit dem Protoonkogen c-Rel verwandt sind und bei Säugetieren fünf Mitglieder umfassen: Rel (cRel), RelA (p65), RelB, NFkappaB1 (p50 und sein Vorläufer p105) und NFkappaB2 (p52 und sein Vorläufer p100). NF-kappaB/Rel-Proteine existieren als Homo- oder Heterodimere, um transkriptionell kompetente oder repressive Komplexe zu bilden. Obwohl die meisten NF-kappaB-Dimere Transkriptionsaktivatoren sind, können die p50/50- und p52/52-Homodimere die Transkription ihrer Zielgene unterdrücken. Das p50/p65-Heterodimer von NF-kappaB kommt in Zellen am reichlichsten vor.

Spezifität

Dieser Antikörper erkennt ein Epitop, das mit dem Zellkern-Lokalisierungssignal (NLS) der p65-Untereinheit des NF-κB-Heterodimers überlappt. Somit bindet er selektiv an die aktivierte Form von NF-κB.

Immunogen

Epitop: NLS der p65-Untereinheit

Peptid, das an BSA gekoppeltem humanem p65 entspricht.

Anwendung

Chromatin-Immunpräzipitation:
Daten einer repräsentativen Charge.
Beschalltes Chromatin aus serumgehungerten, mit TNFα behandelten (20 ng/ml, 30 min) 293-Zellen (~3 x 10E6 Zelläquivalente je IP) wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit 4 µg normalem Maus-IgG oder 4 µg Anti-NF-κB p65 und dem Magna ChIP A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation von NF-αB-p65(RelA)-assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern, IĸBα-Promotor als positive Stelle und β-Aktin-Promotor-Primern als negative Stelle verifiziert (siehe Abbildungen). Die Daten werden als prozentuale Eingabe jeder IP-Probe relativ zur Chromatin-Eingabe für jedes Amplikon und jede ChIP-Probe wie angegeben dargestellt.
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf das Protokoll für EZ-Magna ChIP A (Katalognr. 17-409) oder EZ-ChIP (Katalognr. 17-371).


Western-Blot-Analyse:
Daten einer repräsentativen Charge.
HUVEC-Lysat (Bahn 1, L6-Lysat (Bahn 2) und PC12-Lysat (Bahn 3) wurden durch Elektrophorese aufgelöst, auf eine PVDF-Membran übertragen und mit Anti-NF-κB-p65 (RelA) (1:500-Verdünnung) untersucht.
Proteine wurden mit einem an HRP konjugierten Anti-Maus-Sekundärantikörper der Ziege und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem veranschaulicht.

Die Pfeile zeigen Protein-NF-κB-p65 (RelA) (~65 kDa) (siehe Abbildungen).
Bei ~230 kDa tritt im L6-Lysat eine nichtspezifische Bande auf.

Immunfluoreszenz: Eine 1–10-μg/ml-Konzentration einer früheren Charge wurde in Immunfluoreszenz verwendet.

Immunhistochemie (Paraffinschnitte): Eine 5-10-μg/ml(APAAP)-Konzentration
einer früheren Charge wurde in Immunhistochemie verwendet.

Immunhistochemie (Schnellschnitte): Eine 5–10-μg/ml(APAAP)-Konzentration
einer früheren Charge wurde in Immunhistochemie verwendet.

Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA): Eine 0,5–1-μg/ml-Konzentration einer früheren Charge wurde in Shift-Assay verwendet.

Durchflusszytometrie: Eine frühere Charge dieses Antikörpers wurde im Durchflusszytometrie verwendet.

Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Anwender bestimmt werden.

Dieses Set aus ChIP-validiertem ChIPAb+-NF-κB-p65(RelA)-Antikörper und Primer enthält praktischerweise den Antikörper und die spezifischen PCR-Kontrollprimer.

Forschungs-Unterkategorie
Transkriptionsfaktoren

Forschungskategorie
Epigenetik und Zellkernfunktion

Verpackung

25 Assays je Set. Empfohlene Verwendung: ~4 μg Antikörper je Chromatin-Immunpräzipitation (abhängig vom biologischen Kontext).

Qualität

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus serumgehungerten, mit TNFα behandelten (20 ng/ml, 30 min) 293-Zellen (~3 x 10E6 Zelläquivalente je IP) wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit entweder 4 µg normalem Maus-IgG oder 4 µg Anti-NF-κB p65 und dem Magna ChIP^® A Kit (Katalognr. 17-610) unterzogen.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation von NF-κB-p65(RelA)-assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern, IĸBα-Promotor verifiziert (siehe Abbildungen).
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf das Protokoll für EZ-Magna ChIP A (Katalognr. 17-408) oder EZ ChIP (Katalognr. 17-371).

Zielbeschreibung

~ 65 kDa

Physikalische Form

Anti-NF-κB-p65 (RelA) (Maus, monoklonal). Ein Fläschchen mit 100 µg mit Protein A aufgereinigtem monoklonalem IgG3 in einem Gesamtvolumen von 143 μl in einem Puffer mit 0,02 mol/l Phosphatpuffer, 0,25 mol/l NaCl, pH-Wert 7,6 mit 0,09 % Natriumazid vor der Zugabe von Glycerin zu 30 %. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Maus-IgG. Ein Fläschchen mit 125 µg aufgereinigtem Maus-IgG in 125 µl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.
ChIP-Primer, IĸBα-Promotor. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für den humanen IĸBα-Promotor. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: GAC GAC CCC AAT TCA AAT CG
REV: TCA GGC TCG GGG AAT TTC C

Format: Aufgereinigt

Mit Protein A aufgereinigt

Lagerung und Haltbarkeit

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar. Handhabungsempfehlungen: Das Fläschchen nach dem ersten Auftauen und vor dem Entfernen der Kappe zentrifugieren und die Lösung vorsichtig mischen. In Mikrozentrifugenröhrchen aliquotieren und bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen sind zu vermeiden, da sie das IgG beschädigen und die Produktleistung beeinträchtigen können. Hinweis: Ein Abfall der Gefrierschranktemperatur unter -20 °C kann dazu führen, dass glycerinhaltige Lösungen während der Lagerung einfrieren.

Hinweis zur Analyse

Kontrolle
Einschließlich normales Maus-IgG als Negativkontrolle und für den humanen IĸBα-Promotor spezifische Primer.

Rechtliche Hinweise

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

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