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ChIPAb+-LSD1 (KDM1A)-Antikörper - durch ChIP validiertes Antikörper- und Primer-Set

from rabbit, purified by affinity chromatography

• Synonym(e): Lysine-specific histone demethylase 1A, BRAF35-HDAC complex protein BHC110, Flavin-containing amine oxidase domain-containing protein 2
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.32

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rabbit
• Qualitätsniveau: 100
• Klon: polyclonal
• Aufgereinigt durch: affinity chromatography
• Speziesreaktivität: rat, human, mouse
• Hersteller/Markenname: ChIPAb+; Upstate^®
• Methode(n): ChIP: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_055828
• UniProt-Hinterlegungsnummer: O60341
• Versandbedingung: dry ice

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Alle ChIPAb+-Antikörper werden einzeln (jede Charge, jedes Mal) für die Chromatin-Immunpräzipitation validiert. Jedes ChIPAb+-Antikörper-Set enthält Kontrollprimer (jede Charge wurde durch qPCR geprüft), um Ihre IP-Ergebnisse im stellenspezifischen Kontext biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, ChIP-Protokolle zu validieren, wenn sie unseren Antikörper in ihrem Chromatin-Kontext nutzen. Jedes Set enthält außerdem einen Negativkontrolle-Antikörper, um die Spezifizität der ChIP-Reaktion zu gewährleisten.
Das ChIPAb+-LSD1(KDM1A)-Set enthält den LSD1-Antikörper, ein normales Kaninchen-IgG und positive Kontrollprimer, die eine 85-bp-Verstärkerregion des humanen prostataspezifischen Antigens amplifizieren. LSD1-Antikörper und Negativkontrolle-IgG werden in skalierbarer „je ChIP“-Reaktionsgröße geliefert und können verwendet werden, um die Ausfällung von LSD1-assoziiertem Chromatin funktionell zu validieren.

LSD1 (Lysine-specific histone demethylase 1A), auch als BHC110 bekannt, ist eine Histon-Demethylase, die Lys4 von Histon H3, eine spezifische Markierung für die epigenetische Transkriptionsaktivierung, spezifisch demethyliert und dadurch als Co-Repressor agiert. LSD1 wirkt durch das Oxidieren des Substrats durch FAD, um das entsprechende Imin zu erzeugen, das anschließend hydrolysiert wird. LSD1 demethyliert sowohl mono- als auch trimethyliertes Lys4 von Histon H3 und könnte eine Rolle bei der Unterdrückung von neuronalen Genen spielen. Allein kann es Lys4 von Histon H3 an Nukleosomen nicht demethylieren und erfordert die Gegenwart von RCOR1/CoREST, um diese Aktivität auszuüben. LSD1 kann auch Lys9 von Histon H3, eine spezifische Markierung für die epigenetische Transkriptionsunterdrückung, demethylieren und dadurch die Unterdrückung von Androgenrezeptor-Zielgenen umkehren.

Immunogen

Histidin-markiertes rekombinantes Protein, das LSD1 von voller Länge entspricht.

Anwendung

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus hormongehungerten (72 h) LNCaP-Zellen (~1e5 Zelläquivalente je IP), in die anschließend ein Androgenagonist eingebracht wurde (1 µmol/l CI-4AS-1 über Nacht), wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit entweder 2 µg normalem Kaninchen-IgG (Artikelnr. PP64B) oder 2 µg Anti-LSD1 (Artikelnr. CS207350) und dem Magna ChIP HiSens (Katalognr. 17-10460) unterzogen. Die erfolgreiche Immunpräzipitation von mit LSD1 assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für PSA (Artikelnr. CS207340) als positive Stelle und ChIP-Primern für β-Globin (Artikelnr. CS200591) als negative Stelle verifiziert.
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf die Protokolle für Magna ChIP HiSens (Katalognr. 17-10460) oder EZ-Magna ChIP HiSens (Katalognr. 17-10460).

Chromatin-Immunpräzipitation:
Beschalltes Chromatin aus hormongehungerten (72 h) LNCaP-Zellen (1e5 und 1e6 Zelläquivalente je IP), in die anschließend ein Androgenagonist eingebracht wurde (1 µmol/l CI-4AS-1 über Nacht), wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit entweder 2 µg normalem Kaninchen-IgG (Artikelnr. PP64B) oder 2 µg Anti-LSD1 (Artikelnr. CS207350) und dem Magna ChIP HiSens-Kit (Katalognr. 17-10460) unterzogen. Die erfolgreiche Immunpräzipitation von mit LSD1 assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für PSA (Artikelnr.: CS207340) verifiziert.
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf das Protokoll für Magna ChIP HiSens (Katalognr. 17-10460) oder EZ-Magna ChIP HiSens (Katalognr. 17-10461).

Western-Blot-Analyse:
HeLa-Zellkernextrakt wurde mit Anti-LSD1 (0,05 μg/ml) untersucht.
Die Proteine wurden mit an HRP konjugiertem Anti-Kaninchen-IgG-Sekundärantikörper vom Esel und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem visualisiert.

Forschungs-Unterkategorie
Histone

Forschungskategorie
Epigenetik & Zellkernfunktion

Verwenden Sie den durch ChIP validierten monoklonalen ChIPAb+-LSD1 (KDM1A)-Antikörper der Maus für den Nachweis von LSD1 (Lysine-specific histone demethylase 1A), auch als BRAF35-HDAC-Komplexprotein BHC110 bekannt.

Verpackung

25 Assays je Set. Empfohlene Verwendung: 2 μg Antikörper je Chromatin-Immunpräzipitation (abhängig vom biologischen Kontext).

Qualität

Chromatin-Immunpräzipitation: Beschalltes Chromatin aus hormongehungerten (72 h) LNCaP-Zellen (~1e5 Zelläquivalente je IP), in die anschließend ein Androgenagonist eingebracht wurde (1 µmol/l CI-4AS-1 über Nacht), wurde einer Chromatin-Immunpräzipitation mit entweder 2 µg normalem Kaninchen-IgG (Artikelnr. PP64B) oder 2 µg Anti-LSD1 (Artikelnr. CS207350) und dem Magna ChIP^® HiSens Chromatin-IP-Kit (Katalognr. 17-10460) unterzogen. Die erfolgreiche Immunpräzipitation von LSD1-assoziierten DNA-Fragmenten wurde durch qPCR mit ChIP-Primern für PSA (Artikelnr. CS207340), verifiziert (Abbildung 1).
Bitte beziehen Sie sich für experimentelle Details auf das Protokoll für Magna ChIP HiSens (Katalognr. 17-10460) oder EZ-Magna ChIP HiSens (Katalognr. 17-10461).

Zielbeschreibung

~ 110 kDa gemessen. Uniprot beschreibt zwei Isoformen mit ~92 kDa und ~95 kDa aufgrund von alternatives Spleißen.

Physikalische Form

Affinitätsgereinigt

Anti-LSD1 (Kaninchen, polyklonal), Artikelnr. CS207350. Ein Fläschchen mit 50 µg affinitätsgereinigtem polyklonalem Kaninchen-Antikörper in 72 µl Puffer mit 0,1 mol/l Tris-Glycin (pH-Wert 7,4), 150 mmol/l NaCl und 0,05 % Natriumazid vor der Zugabe von Glycerin zu 30 %. Endkonzentration des Antikörpers: 0,7 mg/ml. Bei -20 °C aufbewahren.

Normales Kaninchen-IgG, Artikelnr. PP64B. Ein Fläschchen mit 125 µg Kaninchen-IgG in 125 µl Lagerpuffer mit 0,05 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

ChIP-Primer, PSA. Artikelnr. CS207340. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μmol/l jedes Primers, spezifisch für die humane Verstärkerregion von prostataspezifischem Antigen (PSA) (chr19:51354179-51354263, hg19 build). Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: GCC TGG ATC TGA GAG AGA TAT CAT C
REV: ACA CCT TTT TTT TTC TGG ATT GTT G

Lagerung und Haltbarkeit

Bei -20 °C ab Empfangsdatum 1 Jahr haltbar. Handhabungsempfehlungen: Das Fläschchen nach dem ersten Auftauen und vor dem Entfernen der Kappe zentrifugieren und die Lösung vorsichtig mischen. In Mikrozentrifugenröhrchen aliquotieren und bei -20 °C aufbewahren. Wiederholte Einfrier-/Auftauzyklen sind zu vermeiden, da sie das IgG beschädigen und die Produktleistung beeinträchtigen können.

Hinweis zur Analyse

Kontrolle
Einschließlich normales Kaninchen-IgG und für die Verstärkerregion von humanem prostataspezifischen Antigen (PSA) spezifische Primer.

Sonstige Hinweise

Konzentration: Die chargenspezifische Konzentration entnehmen Sie bitte dem Analysenzertifikat.

Rechtliche Hinweise

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Haftungsausschluss

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.

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