03-102

RIPAb+ HuR – RIP-validierter Antikörper und Primer-Set

from rabbit

• Synonym(e): ELAV-like protein 1, Hu-antigen R
• UNSPSC-Code: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.32

Eigenschaften

• Biologische Quelle: rabbit
• Qualitätsniveau: 100
• Klon: polyclonal
• Speziesreaktivität: mouse, human, rat
• Hersteller/Markenname: RIPAb+; Upstate^®
• Methode(n): RIP: suitable; immunocytochemistry: suitable; immunohistochemistry: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable; western blot: suitable
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_001410
• UniProt-Hinterlegungsnummer: Q15717
• Versandbedingung: dry ice
• Angaben zum Gen: human ... ELAVL1(1994)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

RIPAb+-Antikörper werden mit dem RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitation(RIP)-Assay beurteilt. Jedes RIPAb+-Antikörper-Set enthält quantitative RT-PCR-Kontrollprimer (RIP-Primer), um Ihre IP-Ergebnisse durch die erfolgreiche Co-Präzipitation eines spezifischen RNA-Ziels (sofern ein solches Ziel bekannt ist) biologisch zu validieren. Das qPCR-Protokoll und die Primer-Sequenzen werden bereitgestellt, was es Forschenden ermöglicht, RIP-Protokolle zu validieren, wenn sie den Antikörper für ihre Experimente nutzen. Jedes Set enthält auch einen negativen Kontrollantikörper, um die Spezifität der RIP-Reaktion zu gewährleisten.
Das RIPAb+ HuR-Set enthält den HuR-Antikörper, einen negativen Kontrollantikörper (aufgereinigtes Kaninchen-IgG) und positive qPCR-Primer, die ein 100-bp-Fragment der humanen beta-Actin(ACTB)-cDNA amplifizieren. Die HuR- und Negativkontroll-Antikörper werden in einer skalierbaren Reaktionsgröße „nach RIP“ geliefert und können zur funktionellen Validierung der HuR-assoziierten RNA-Fällung verwendet werden.

Immunogen

Epitop: Aminosäuren 1–13 von HuR

Anwendung

Dieser validierte RIPAb+ HuR -RIP Antikörper und das Primer-Set enthalten praktisch den Antikörper und die spezifischen PCR-Kontrollprimer.

Immunpräzipitation von RIP-Lysat:
RIP-Lysat, präpariert aus MCF7-Zellen (2 x 10⁶ Zelläquivalente pro IP), wurde einer Immunpräzipitation unterzogen, wobei 0.5 μg entweder von normalem Kaninchen-IgG- oder Anti-HuR-Antikörper verwendet wurden. Die ausgefällten Proteine wurden durch Elektrophorese aufgetrennt, auf Nitrocellulose übertragen und mit Anti-HuR (1,0 μg/ml) getestet.
Die Proteine wurden mit dem One-Step IP-Western-Kit (GenScript Best.- Nr. L00231) visualisiert (Siehe Abbildungen).

Western-Blot-Analyse:
3T3/A31-Lysat wurde aufgetrennt durch Elektrophorese, zu einer PVDF-Membran transferiert und mit HuR, hu getestet (Verdünnung 1:500). Die Proteine wurden mit an HRP konjugiertem Anti-Kaninchen vom Esel und einem Chemilumineszenz-Nachweissystem visualisiert. (Siehe Abbildungen).

Analyse mittels Immunpräzipitation:
Mit 10 µg dieses Antikörpers wurde HuR aus 500 µg 3T3/A31 RIPA-Lysat immunopräzipitiert (siehe Abbildungen).

Immunozytochemische Analyse:
Konfokale IF-Analyse von HeLa, NIH/3T3 unter Verwendung von Anti-HuR (rot). Aktin-Filamente wurden mit AlexaFluor 488 Phalloidin (Grün) markiert. Der Zellkern wird mit DAPI (Blau) gefärbt (siehe Abbildungen).

Qualität

RNA-Bindungsprotein-Immunpräzipitation:
RIP-Lysat, präpariert aus HeLa-Zellen (2 x 10⁷ Zelläquivalente pro IP), wurde einer Immunpräzipitation unterzogen, wobei 5 µg eines normalen Kaninchen-IgG- oder Anti-HuR-Antikörpers und das Magna RIP Kit (Best.- Nr. 17-700) verwendet wurden.
Die erfolgreiche Immunpräzipitation von HuR-assoziierter RNA wurde mittels qPCR unter Verwendung von RIP-Primern und ACTB verifiziert (siehe Abbildungen).
Bitte beachten Sie das Magna RIP^® Protokoll (Best.- Nr. 17-700) oder das EZ-Magna RIP Protokoll (Best.- Nr. 17-701) für experimentelle Details.

Zielbeschreibung

35 kDa

Physikalische Form

Anti-HuR (Kaninchen polyklonal). Ein Fläschchen mit 50 μg aufgereinigtem polyklonalem Kaninchenantikörper in 100 μl Puffer mit PBS und 0,05 % Natriumazid mit 50 % Glycerin. Flüssig bei -20 °C.

Normales Kaninchen-IgG. Ein Fläschchen mit 125 μg aufgereinigtem Kaninchen-IgG in 125 μl Lagerpuffer mit 0,1 % Natriumazid. Bei -20 °C aufbewahren.

RIP-Primer, ACTB. Ein Fläschchen mit 75 μl von 5 μM jedes für humanen Beta-Actin(ACTB)-spezifischen Primers. Bei -20 °C aufbewahren.
FÜR: TTG TTA CAG GAA GTC CCT TGC C
REV: ATG CTA TCA CCT CCC CTG TGT G

Format: Aufgereinigt

Hinweis zur Analyse

Kontrolle
Enthält Kaninchen-IgG-Antikörper als Negativkontrolle und Kontrollprimer, die für humanes Beta-Actin (ATCB) spezifisch sind.

Rechtliche Hinweise

MAGNA RIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• Flammpunkt (°F): Not applicable
• Flammpunkt (°C): Not applicable