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Anoctamin 1 calcium-activated chloride channel downregulates estrogen production in mouse ovarian granulosa cells.

Endocrinology (2014-05-16)
Meiyan Sun, Yujie Sui, Lihua Li, Weiheng Su, Feng Hao, Qi Zhu, Weihua Di, Hongwen Gao, Tonghui Ma
RESUMEN

Calcium-dependent chloride conductances have been described in chicken and human granulosa cells (GCs) and may be involved in steroidogenesis. However, the molecular identities of corresponding chloride channels remain unknown. The purpose of this study was to explore the expression and function of the Anoctamin 1 (ANO1) calcium-activated chloride channel (CaCC) in mouse ovary. ANO1 mRNA and protein expression was identified in mouse ovary GCs by RT-PCR, immunoblot, and immunostaining. Patch-clamp analysis on freshly isolated GCs identified an outwardly rectifying Ca(2+)-activated Cl(-) current that was completely blocked by a selective ANO1 inhibitor T16Ainh-A01. Knockdown of ANO1 mRNA or incubation with a selective inhibitor T16Ainh-A01 enhanced estradiol production, whereas a selective ANO1 activator Eact significantly inhibited estradiol production in primary cultured GCs. The ANO1 expression or activation increases the phosphorylation of ERK1/2 and decreases aromatase expression. The ANO1 expression level is remarkably higher at the proestrous and estrous stages in the estrous cycle. In vivo study indicated a profound induction of ANO1 expression in ovarian GCs by pregnant mare serum gonadotropin (PMSG) that can be further augmented by hCG treatment, suggesting that both FSH and LH may upregulate ANO1 expression at the proestrous and estrous stages. ANO1 expression was remarkably reduced in DHEA-induced PCOS ovary. These data identified for the first time the expression of ANO1 Ca(2+) activated Cl(-) channel in mouse ovarian GCs and determined its negative regulation on estrogen production possibly through MEK-ERK signaling cascade. The present study provided new insights into the molecular mechanisms for the regulation of folliculogenesis and ovulation.

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Cloruro de sodio, for molecular biology, DNase, RNase, and protease, none detected, ≥99% (titration)
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ITS Liquid Media Supplement (100×), liquid, sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture
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Sodium chloride solution, 0.9% in water, BioXtra, suitable for cell culture
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Cloruro de sodio, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99%
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Sodium chloride solution, 5 M in H2O, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture
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SAFC
Sodium chloride solution, 5 M
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Hexadimethrine bromide, ≥94% (titration)
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Selenium, powder, −100 mesh, 99.99% trace metals basis
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Cloruro de sodio, JIS special grade, ≥99.5%
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Selenium, powder, −100 mesh, ≥99.5% trace metals basis
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Sodium chloride solution, BioUltra, for molecular biology, ~5 M in H2O
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Cloruro de sodio, 99.999% trace metals basis
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Cloruro de sodio, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (AT)
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β-Estradiol, meets USP testing specifications
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Cloruro de sodio, SAJ first grade, ≥99.0%
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Cloruro de sodio, BioXtra, ≥99.5% (AT)
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USP
β-Estradiol, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
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Selenium, pellets, <5 mm particle size, ≥99.999% trace metals basis
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Cloruro de sodio, BioPerformance Certified, ≥99% (titration), suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture
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Selenium, pellets, <5 mm, ≥99.99% trace metals basis
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Cloruro de sodio, AnhydroBeads, −10 mesh, 99.999% trace metals basis
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Sodium chloride-35Cl, 99 atom % 35Cl
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Cloruro de sodio, meets analytical specification of Ph. Eur., BP, USP, 99.0-100.5%
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Sodium chloride solution, 1 M
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Sodium chloride solution, 5 M
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Cloruro de sodio, random crystals, optical grade, 99.9% trace metals basis
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Sodium chloride solution, 0.85%
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Supelco
Cloruro de sodio, reference material for titrimetry, certified by BAM, >99.5%
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Sodium chloride solution, 0.1 M
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Cloruro de sodio, Pharmaceutical Secondary Standard; Certified Reference Material
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