Kits para aislamiento celular

El estudio de las células procedentes de tejidos in vivo es el que mejor permite predecir la biología y la función celulares, pero la complejidad biológica puede confundir los resultados a menos que se aíslen las poblaciones celulares deseadas. Para estudiar los fenotipos celulares, se ha desarrollado diversos métodos para aislar las poblaciones celulares en función de sus características definitivas. El aislamiento de las poblaciones celulares no sólo ayuda a la investigación biológica, sino que también facilita las pruebas de diagnóstico clínico. Los métodos de aislamiento más eficaces demuestran un mayor rendimiento, pureza y viabilidad. El enriquecimiento o la purificación de las poblaciones deseadas pueden lograrse mediante selección positiva, empleando a menudo anticuerpos que se unen a marcadores específicos de las células, o mediante selección negativa que permite aprovechar las propiedades biofísicas para eliminar las células no deseadas con el fin de enriquecer la población de interés.

El fraccionamiento de las células en sus componentes subcelulares ha sido fundamental durante mucho tiempo para los estudios de biología celular. Se han utilizado ampliamente técnicas de fraccionamiento subcelular para estudiar la estructura y la función de los orgánulos y los compartimientos subcelulares, así como para comprender la ubicación, el procesamiento y el tráfico de las biomoléculas. El objetivo de la mayoría de las técnicas de fraccionamiento es obtener orgánulos y macromoléculas celulares en un estado funcional, en el que conserven sus propiedades bioquímicas intrínsecas. Esto suele conseguirse mediante lisis celular utilizando medios mecánicos suaves o con detergentes suaves, seguidos a menudo por el fraccionamiento de los componentes celulares por centrifugación diferencial.

Aislamiento de células por fenotipo

Los preadipocitos pueden utilizarse para estudiar el proceso de adipogénesis y, después de su diferenciación, para evaluar la lipólisis, la comunicación celular, la función endocrina y la actividad metabólica.

Nuestro kit de aislamiento de preadipocitos combina las herramientas y los reactivos necesarios para aislar la fracción celular vascular estrómica del tejido adiposo. La fracción vascular estrómica resultante se cultiva en una placa de cultivo de tejidos, donde se adhieren los preadipocitos. Los preadipocitos conservan la capacidad de proliferar y diferenciarse en adipocitos cuando son tratados con componentes inductores de la diferenciación.

Aislamiento de orgánulos y complejos subcelulares

La derivación de los componentes subcelulares promueve la comprensión de la función de los orgánulos y puede conducir a nuevas biotecnologías. Por ejemplo, los núcleos aislados de células de mamífero pueden utilizarse posteriormente para la síntesis de transcritos primarios de ARN endógeno. El kit de alto rendimiento de preparación de núcleos EZ (NUC101, NUC201) se desarrolló para el aislamiento rápido de núcleos de la mayoría de las células de mamífero.

Para la detección de la integridad mitocondrial y del potencial de membrana, en nuestro kit de tinción mitocondrial (CS0390, CS0760) se utiliza el colorante JC-1 (420200, T4069), que se concentra en la matriz de las mitocondrias para formar agregados fluorescentes rojos. Eventos como la apoptosis que disipan el potencial de la membrana mitocondrial impiden la acumulación del colorante JC-1 en las mitocondrias, y luego puede utilizarse un microscopio de fluorescencia para distinguir las mitocondrias viables de las alteradas.

También pueden aislarse complejos subcelulares que no son orgánulos como los proteasomas para utilizar en análisis proteolíticos. En nuestro método utilizamos microesferas de matriz de afinidad que contienen una proteína de fusión a GST con un dominio similar a la ubiquitina unido a la GST-agarosa.

Enriquecimiento citoesquelético

Trabajar con las proteínas asociadas al citoesqueleto de actina ha sido tradicionalmente un reto debido a la insolubilidad de los elementos del citoesqueleto en detergentes como el Triton X-100. El kit de aislamiento y enriquecimiento del citoesqueleto ProteoExtract^® de Millipore proporciona disoluciones tampón para purificación del citoesqueleto que conservan la adhesión focal y las proteínas asociadas a la actina, al tiempo que eliminan de la célula las proteínas solubles, citoplasmáticas y nucleares. Este enfoque mejora la capacidad para detectar y estudiar las poco abundantes proteínas asociadas a la actina que suelen estar enmascaradas en los métodos de transferencia Western para el análisis de lisados de células completas.