流式細胞計
流式細胞計法是一種使用單個或多個雷射來提供單細胞多參數分析的技術。當細胞快速流經每個雷射時,每個細胞或微粒都會被可見光散射或螢光分析。獨立於光散射分析,螢光測量是透過轉染和表達常見的螢光蛋白(如綠色螢光蛋白,GFP),並使用螢光結合抗體或螢光染料染色來實現。流式細胞計法是一種功能強大的技術,常用於分子和細胞生物學研究應用,包括免疫學、癌症生物學和疾病研究。
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流式細胞計技術抗體和標籤
進行流式細胞計技術分析需要使用各種流式細胞計技術抗體和標籤。流式細胞計抗體用於特異性結合不同的細胞標記,有助於表徵細胞類型和評估實驗中蛋白質表達的任何變化。根據實驗設計,有多種類型的標籤可用於在流式細胞計中檢測可視化抗體,包括核酸染料、細胞活力染料、聚合物染料、量子點、小有機分子和螢光蛋白。抗體通常是透過直接結合(市售產品或結合套件,允許終端使用者進行反應)或使用二抗來標示。
流式細胞計應用
許多研究領域使用流式細胞計並經常分析不同細胞群中的多種參數。常見的分子生物學應用包括分析在各種細胞類型中誘導表達的重組表達螢光蛋白,以闡明基因功能或用於 體內 細胞追蹤。DNA 染色可以進行細胞週期分析,而抗體的使用則可以進行多種分析,包括信號傳導、RNA 和蛋白質表達。然而,免疫分型是流式細胞計最常用的應用之一。在免疫表型分析中,螢光鉻結合抗體會針對多種細胞表面抗原,以辨識細胞群中的特定免疫細胞。
流式細胞計數據分析
流式細胞計數據分析通常涉及識別特定區域的細胞或細胞簇,並在實驗中應用其他參數,包括研究是否存在其他細胞識別因子,以進一步瞭解細胞特性。
流式細胞計儀器
流式細胞計中使用的主要元件包括電子、光學和流體學。光學元件包括激發光學元件 (雷射) 和收集光學元件,收集光學元件包括光電二極體和光電倍增管 (PMT)。重要的是,電子元件會將偵測器的資訊轉換成可由電腦解讀的數位訊號。其他系統的組合有助於進行更先進的樣本分析,包括使用細胞分選器來淨化和收集樣本,以及結合流式細胞計法與螢光顯微鏡的成像細胞計。
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