免疫组织化学

IHC组织制备、抗原修复和预处理

通常，组织须固定、石蜡包埋并通过显微切片机切片后才可进行IHC分析。初步组织制备后的一个重要步骤是抗原修复。如需破坏固定过程形成的蛋白质交联并暴露隐藏抗原位点，必须进行此步骤。抗原修复和预处理条件必须实证确定，因此抗原表位可及性会因多种生物学因素呈现明显差异。例如，某些抗原需要更激进的预处理才可“暴露”抗体结合表位，而某些抗原可能根本不需要预处理。热诱导表位修复（HIER）是两种常见抗原修复预处理方法之一，需采用热源结合缓冲液和酶（蛋白酶K）。另一种方法是蛋白裂解诱导表位修复（PIER），可能需要用到多种蛋白酶，如蛋白酶K、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或胃蛋白酶。

IHC染色和检测

组织制备和抗原修复预处理后，可通过多种方法可视化抗体-抗原互作。常用方法之一是使用一抗，即利用一抗结合辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶等催化显色反应的酶。也可采用免疫荧光（IF）法，即使用荧光素、罗丹明或Alexa Fluor等荧光团标记的抗体。此外，还可选择使用未标记一抗，但通过标记二抗或更复杂的检测体系间接检测抗原。此时，应针对每种检测方案确定一抗和二抗的最佳滴度。