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CRISPR08

Sigma-Aldrich

CRISPR UNIVERSAL NEGATIVE CONTROL 3

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About This Item

分類程式碼代碼:
41106609
NACRES:
NA.51

形狀

liquid

品質等級

包裝

vial of 50 μL

濃度

20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)

應用

CRISPR

運輸包裝

dry ice

儲存溫度

−20°C

一般說明

通用CRISPRs阴性对照被设计为不能被人类,小鼠或大鼠基因组识别。单个载体形式包括Cas表达盒和gRNA序列。GFP通过2A肽段连接,与Cas9切口酶蛋白的相同mRNA共表达,实现了对转染效率的追踪,也能通过荧光激活细胞分选术(FACS)对细胞群落进行富集。

應用

Functional Genomics/Target Validation
  • Creation of gene knockouts in cell lines
  • Creation of knock-in cell lines with promoters, fusion tags or reporters integrated into endogenous genes

特點和優勢

无需特定的靶向CRISPR/Cas9 系统,即可表达Cas9和GFP。

成分

1 管包含1μg 表达非靶向向导序列的U6-gRNA/CMV-Cas9-GFP 质粒。

原則

CRISPR/Cas 是细菌和古细菌的一种防御系统,可用来对抗入侵的病毒和质粒。来自酿脓链球菌的II型CRISPR/Cas系统包含两种分子元件,即一个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA),该系统经过基因改造而被用于真核系统中。Cas9 核酸内切酶可在单个gRNA的引导下,在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似,细胞随后会激活内源性DNA修复程序,即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR),对目标DSB进行修复。

外觀

Sigma U6-gRNA/CMV-Cas9-GFP 质粒表达非靶向的向导序列,以浓度 20ng/μl in 50μl的溶液形式提供。

準備報告

Sigma CRISPR质粒产品为小量提取包装,可能不适用于转染到特殊类型的细胞中。为得到最佳结果,我们建议在转染前使用无内毒素的DNA纯化试剂盒大量提取质粒。

其他說明

文献中使用的标准转染浓度范围为2~8μg的单个的表达向导RNA和Cas9的载体。(上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染)

法律資訊

CRISPR专利正在申请中

儲存類別代碼

12 - Non Combustible Liquids

水污染物質分類(WGK)

WGK 1

閃點(°F)

Not applicable

閃點(°C)

Not applicable


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View experimental data showing crispr/cas expression and enrichment using FACS

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