DPNI-RO

Dpn I

from Diplococcus pneumoniae

• 分類程式碼代碼: 12352204

屬性

• 生物源: bacterial (Diplococcus pneumoniae)
• 品質等級: 100
• 形狀: solution
• 包裝: pkg of 1,000 U (10742988001 [10 U/μl]); pkg of 200 U (10742970001 [10 U/μl])
• 製造商／商標名: Roche
• 參數: 37 °C optimum reaction temp.
• 儲存溫度: −20°C

描述

一般說明

同裂酶
该酶是Bsp143 I、Dpn II、Mbo I、Nde II和Sau3A I的同裂酶。
甲基化敏感性
如果不存在6-甲基腺嘌呤，该酶仅在指定位点（*）处出现5-甲基胞嘧啶时发生抑制。
典型的连接和再切割检测
将通过完全消化1μg pBR322 DNA所获得的Dpn I片段在+4°C下与1U T4 DNA连接酶在10μl含有66mM Tris-HCl、5mM MgCl₂、5mM二硫苏糖醇、1mM ATP、pH 7.5（在+ 20°C时）的缓冲液中连接16小时。可连接并随后用Dpn I重新切割的产物的百分比（产生pBR322×Dpn I片段的典型模式）已在检验报告的“Lig”和“Rec”下列出。

Dpn I需要依靠甲基化的腺嘌呤残基才能发挥活性，因此只能消化含N6-甲基腺嘌呤的G^mATC序列。这样的甲基化序列来自dam甲基化酶的催化。这种对甲基化的要求可用来区分Dpn I、Mbo I和Sau3A I三种酶，其中，Mbo I受dam甲基化抑制，Sau3A I则不受dam甲基化影响。与Mbo I和Sau3A I相比，Dpn I还在识别序列上的不同位点切割。

特異性

识别位点：GmAT*C
G^mAT*C
识别位点：GmA↓T*C
G^mA↓T*C
热灭活：在65 °C孵育15分钟后Dpn I未失活。

應用

在PCR介导突变中，DpnI核酸酶已被用于PCR后的野生型DNA的消化。

品質

缺乏非特异性内切核酸酶活性
将1μg pBR322 DNA 与过量的Dpn I一起在50μl SuRE/Cut 缓冲液A中孵育16小时。检验报告(CoA）提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。
缺乏核酸外切酶活性
将大约5μg [³H]标记的小牛胸腺DNA与3μl Dpn I一起溶于总体积为100μl 50mM Tris-HCl溶液（含10 mM MgCl₂、1mM二硫赤藓糖醇，pH约7.5）中,并在+ 37℃下孵育4小时。根据检验报告所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。

相容性

Dpn I可生成具有与任何钝端相容的钝端片段。

DNA分析

不同DNA上的切割位点数量

• λ：116
• φX174: 0
• Ad2: 87
• M13mp7: 8
• pBR322: 22
• pBR328: 27
• pUC18: 15
• SV40: 8

單位定義

在+37°C，总体积为25 μl (1x) SuRE/Cut缓冲液A中，一个单位表示在1个小时内裂解1 μg pBR322 DNA的酶活性。由于pBR322 DNA的完全Dpn I消化需要完全甲基化的GATC序列，因此在活性测定过程中可能会观察到< 5%的部分消化条带。

分析報告

SuRE/Cut缓冲体系
建议使用粗体强调的缓冲液以获得最佳活性

• A: 100%
• B: 75-100%
• H: 75-100%
• L: 50-75%
• M: 75-100%

在PCR缓冲液中的活性：100%

在PCR混合液（Taq DNA聚合酶缓冲液）中的相对活性为100%。PCR混合液含有λDNA、引物、10mM Tris-HCl（pH 8.3，20℃）、50mM KCl、1.5mM MgCl₂、200 μM dNTP、2.5 U Taq DNA聚合酶。该混合液可用于25个扩增循环。在Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合反应缓冲液中的活性为100%。Pwo SuperYield DNA聚合酶PCR混合液不在美国销售。

其他說明

仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。

僅套裝組件

• Enzyme Solution
• SuRE/Cut Buffer A 10x concentrated

安全資訊

• 儲存類別代碼: 12 - Non Combustible Liquids
• 水污染物質分類（WGK）: WGK 1
• 閃點（°F）: does not flash
• 閃點（°C）: does not flash