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Roche

逆转录酶检测,比色法

suitable for enzyme immunoassay, kit of 1 (14 components), sufficient for ≤200 tests

同義詞:

RT-PCR

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About This Item

分類程式碼代碼:
41105333

用途

sufficient for ≤200 tests

品質等級

包裝

kit of 1 (14 components)

製造商/商標名

Roche

技術

enzyme immunoassay: suitable

儲存溫度

−20°C

一般說明

比色酶免疫测定法,可用于通过将地高辛和生物素标记的dUTP掺入DNA中来定量测定逆转录病毒的逆转录酶活性。

應用

逆转录酶检测法设计用于定量测定细胞培养物和其他生物样品中的RT活性。该检测方法可用于确定逆转录病毒在培养中的哺乳动物细胞(经逆转录病毒感染的)中的增殖。该检测也可用于RT抑制剂的体外筛选。

包裝

1个试剂盒包含14种组分。

規格

该检测方法可检测天然或重组逆转录病毒的逆转录酶活性,包括HIV-1、HIV-2、SIV-1、AMV和M-MulV的活性。
逆转录酶(RT)活性的测定已广泛应用于逆转录病毒繁殖的体外测试。早期原病毒DNA的合成需要RT,因此其是抗逆转录病毒治疗的主要靶标(例如在获得性免疫缺陷综合症(AIDS)中)。逆转录酶通常使用与各种引物复合的RNA作为DNA合成的模板。为了检测或定量RT活性,传统上通常对掺入的放射性标记核苷酸进行定量。
检测时间:大约4小时(对于1小时的酶反应来说),大约18小时(对于15小时的酶反应来说)。
样品材料:细胞培养上清液和其他生物样品、RT抑制剂。
灵敏度:逆转录酶检测可在1小时反应中检测到20pg HIV-1逆转录酶。可以在过夜反应中检测到1pg。

原則

逆转录酶检测,比色法,利用逆转录酶合成DNA的能力[使用杂合poly(A)x oligo(dT)15作为模板和引物]。其可避免使用标准RT测定中所使用的[3H]-或[32P]-标记的核苷酸。代替放射性标记的核苷酸,以优化的比例将地高辛和生物素标记的核苷酸通过RT活性掺入相同的DNA分子中。试剂盒中提供有模板/引物杂交体,但是由于检测的灵活性,其允许使用自选的模板(例如病毒模板)。以合成的DNA作为RT活性参数,根据夹心ELISA实验方案对DNA进行检测和定量:生物素标记的DNA结合至链霉亲和素包被的微孔板模块的表面。在下一步中,加入与过氧化物酶缀合的地高辛抗体(抗-DIG-POD),并与地高辛标记的核苷酸进行结合(经Institute Pasteur许可)。最后,加入过氧化物酶底物ABTS。过氧化物酶可催化底物的裂解以产生有色反应产物。使用微孔板(ELISA)读数器对样品的吸光度进行测定,其与样品中的RT活性水平直接相关。

其他說明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

僅套裝組件

產品號碼
描述

  • HIV-1 Reverse Transcriptase

  • Incubation Buffer

  • Nucleotides

  • Template/Primer Hybrid

  • Lysis Buffer

  • Anti-Digoxigenin-POD antibody

  • Washing Buffer Concentrate 10x concentrated

  • Conjugate Dilution Buffer

  • Substrate Buffer

  • ABTS Substrate

  • Substrate Enhancer

  • Microplate Modules, precoated with streptavidin

  • One Strip Frame (for 8-well microplate modules)

  • Cover Foils for Microplates

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象形圖

CorrosionExclamation mark

訊號詞

Danger

危險聲明

危險分類

Aquatic Chronic 3 - Eye Dam. 1 - Skin Sens. 1

儲存類別代碼

12 - Non Combustible Liquids

水污染物質分類(WGK)

WGK 2

閃點(°F)

does not flashNot applicable

閃點(°C)

does not flashNot applicable


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