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一般說明
TRAPeze RT™ 端粒酶检测试剂盒是一种高灵敏度的体外测定，可用于荧光检测和实时定量端粒酶活性。它结合了原始TRAPeze™分析的改进，并增加了使用荧光能量转移（ET）引物定量端粒酶活性的能力。
端粒是在真核生物染色体末端发现的特定结构。在人类染色体中，端粒由数千个6个碱基重复序列（TTAGGG）（1-3）组成。有人提出端粒保护染色体末端，因为缺乏端粒的受损染色体会发生融合、重排和易位（2）。在体细胞中，由于DNA聚合酶复合物无法合成滞后链的5′末端（8，9），端粒长度在体内和体外都随着每个细胞分裂而逐渐缩短（4-7）。
端粒酶是一种核糖核蛋白，可以其RNA成分为模板合成端粒重复序列并将其引导至现有端粒的3′端（10-14）。已证明端粒酶活性在永生细胞、癌症和生殖细胞中特异性表达（15，16），在DNA复制过程中，端粒酶活性补偿了端粒缩短，从而稳定了端粒长度（7，17）。这些观察结果导致了一个假设，即当达到临界端粒长度时，端粒长度可能充当“有丝分裂时钟”来感知细胞分裂的数量，并最终发出复制性衰老或程序性细胞死亡的信号。因此，端粒酶活性在癌细胞中的表达可能是肿瘤发生和发展的必要且必不可少的步骤（16，18-20）。最近已经报道了端粒酶表达和端粒长度稳定与人类细胞寿命延长之间的因果关系（21）。
灵敏有效的基于PCR的端粒酶活性检测方法TRAP（端粒重复扩增方案）的开发（15，22）使大规模研究人类细胞和组织中的端粒酶活性成为可能（15，23-29）。迄今为止，在超过20种不同类型的癌症中，已在超过85%的所有测试肿瘤中检测到端粒酶活性（30-31）。
TRAPeze RT™ 端粒酶检测试剂盒是一种高灵敏度的体外测定，可用于荧光检测和实时定量端粒酶活性。它对最初引入基于凝胶的TRAPeze™ 端粒酶检测试剂盒（目录号S7700）的原始TRAP分析进行了改进，并增加了使用类似于TRAPeze™ XL端粒酶的荧光能量转移（ET）引物定量端粒酶活性的能力检测试剂盒（目录号S7707）。与最初的TRAPeze™试剂盒一样，包括减少扩增伪影的引物序列修饰和用于生成标准曲线的PCR对照。此外，TRAPeze™ RT和XL试剂盒均使用荧光能量转移（ET）引物生成荧光标记的TRAP产物，从而可以对端粒酶活性进行非同位素定量分析。
这些ET引物（Amplifluor®引物）的独特设计允许通过直接测量反应容器中的实时荧光发射来检测和定量端粒酶活性。由于Amplifluor® 引物仅在掺入TRAP产物后才会发出荧光，因此无需进行PCR后样品操作，例如电泳凝胶或ELISA分析，从而降低了残留污染的风险。与使用定性ELISA的平台不同，当以高通量96孔格式进行检测时，定量分析不会受到影响。此外，还单独提供了一个单独的对照，以评估实验样品中可能存在的PCR抑制剂。（请参见产品说明书以获取参考）。
端粒酶是一种核糖核蛋白，可以其RNA成分为模板合成端粒重复序列并将其引导至现有端粒的3′端（10-14）。已证明端粒酶活性在永生细胞、癌症和生殖细胞中特异性表达（15，16），在DNA复制过程中，端粒酶活性补偿了端粒缩短，从而稳定了端粒长度（7，17）。这些观察结果导致了一个假设，即当达到临界端粒长度时，端粒长度可能充当“有丝分裂时钟”来感知细胞分裂的数量，并最终发出复制性衰老或程序性细胞死亡的信号。因此，端粒酶活性在癌细胞中的表达可能是肿瘤发生和发展的必要且必不可少的步骤（16，18-20）。最近已经报道了端粒酶表达和端粒长度稳定与人类细胞寿命延长之间的因果关系（21）。
灵敏有效的基于PCR的端粒酶活性检测方法TRAP（端粒重复扩增方案）的开发（15，22）使大规模研究人类细胞和组织中的端粒酶活性成为可能（15，23-29）。迄今为止，在超过20种不同类型的癌症中，已在超过85%的所有测试肿瘤中检测到端粒酶活性（30-31）。
TRAPeze RT™ 端粒酶检测试剂盒是一种高灵敏度的体外测定，可用于荧光检测和实时定量端粒酶活性。它对最初引入基于凝胶的TRAPeze™ 端粒酶检测试剂盒（目录号S7700）的原始TRAP分析进行了改进，并增加了使用类似于TRAPeze™ XL端粒酶的荧光能量转移（ET）引物定量端粒酶活性的能力检测试剂盒（目录号S7707）。与最初的TRAPeze™试剂盒一样，包括减少扩增伪影的引物序列修饰和用于生成标准曲线的PCR对照。此外，TRAPeze™ RT和XL试剂盒均使用荧光能量转移（ET）引物生成荧光标记的TRAP产物，从而可以对端粒酶活性进行非同位素定量分析。
这些ET引物（Amplifluor®引物）的独特设计允许通过直接测量反应容器中的实时荧光发射来检测和定量端粒酶活性。由于Amplifluor® 引物仅在掺入TRAP产物后才会发出荧光，因此无需进行PCR后样品操作，例如电泳凝胶或ELISA分析，从而降低了残留污染的风险。与使用定性ELISA的平台不同，当以高通量96孔格式进行检测时，定量分析不会受到影响。此外，还单独提供了一个单独的对照，以评估实验样品中可能存在的PCR抑制剂。（请参见产品说明书以获取参考）。
包裝
该试剂盒提供的试剂足以进行224次TRAPeze™ Rt反应。
成分
CHAPS裂解缓冲液（13.5mL）
5X TRAPeze™ RT反应混合物（1.12mL）
5X TRAPeze™ 对照反应混合物（1.12mL）
PCR级水（8.2mL）
TSR8*（定量控制模板）（45 μL）
TSK*（pcr抑制/标准化控制）（45 μL）
对照细胞团块（端粒酶阳性细胞；106个细胞）
* 注意-参考章节II.试剂盒组件，产品说明书中的注意事项。
5X TRAPeze™ RT反应混合物（1.12mL）
5X TRAPeze™ 对照反应混合物（1.12mL）
PCR级水（8.2mL）
TSR8*（定量控制模板）（45 μL）
TSK*（pcr抑制/标准化控制）（45 μL）
对照细胞团块（端粒酶阳性细胞；106个细胞）
* 注意-参考章节II.试剂盒组件，产品说明书中的注意事项。
儲存和穩定性
1.CHAPS裂解缓冲液 - 15℃至-25℃
2.5X TRAPeze™ RT反应混合物 -15℃至-25℃
3.5X TRAPeze™ 对照反应混合物 2℃至8℃
4.PCR - 级水 - 15℃至-25℃
5.TSR8 -15℃至-25℃
6.TSK -15℃至-25℃
7.对照细胞团块 -75℃至-85℃
2.5X TRAPeze™ RT反应混合物 -15℃至-25℃
3.5X TRAPeze™ 对照反应混合物 2℃至8℃
4.PCR - 级水 - 15℃至-25℃
5.TSR8 -15℃至-25℃
6.TSK -15℃至-25℃
7.对照细胞团块 -75℃至-85℃
法律資訊
ABI PRISM is a registered trademark of Applera Corporation or its subsidiaries in the US and/or certain other countries
Amplifluor is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Opticon is a trademark of Bio-Rad Laboratories, Inc.
TRAPEZE is a trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
iCycler is a registered trademark of Bio-Rad
訊號詞
Warning
危險聲明
危險分類
Aquatic Chronic 3 - Met. Corr. 1
儲存類別代碼
8B - Non-combustible corrosive hazardous materials
閃點（°F）
Not applicable
閃點（°C）
Not applicable
分析證明 (COA)
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