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一般說明
SUMO蛋白酶是一类通用的酶,其特异性去除翻译后蛋白修饰(PTM)——所谓的小泛素相关修饰物(SUMO),属于泛素和/或泛素样蛋白(UBL)的翻译后蛋白修饰类。通常称为“SUMO蛋白酶”的酶是来自酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的泛素样特异性蛋白酶1(Ulp1)。这是这类酶中第一个被分离出来的。SUMO蛋白酶以“无痕”方式特异性切割SUMO部分。SUMO蛋白酶识别泛素样SUMO结构域的三级结构,并在SUMO结构域的C末端,水解x-Gly-Gly-x序列中Gly-Gly键后的肽键。除了切割天然SUMO修饰的蛋白质外,SUMO蛋白酶还用于切割重组SUMO融合蛋白。SUMO结构域是已经的溶解度增强融合标签,用于重组蛋白表达组氨酸标签也可以作为纯化标签添加到SUMO结构域的N末端。该 SUMO蛋白酶产物携带 6x 组氨酸标签。因此,在消化反应之后,它可以与裂解的SUMO结构域一起容易地去除
SUMO蛋白酶在很宽的温度范围(2-30°C),离子强度范围(0-400 mM NaCl)和pH 范围(6-8.5)内都有活性。然而,其活性可能因底物和条件而变化。研究人员需要优化其特定的反应条件。作为初步建议,每 mg 靶蛋白可以使用20 单位的SUMO蛋白酶,在30℃ 下,1 小时,或在2-8℃ 下过夜。然后可以通过 SDS-PAGE 估计切割效率。如果需要,然后可以调整 SUMO蛋白酶的量。SUMO蛋白酶在还原剂存在下效果更好,例如0.5-2mM DTT。反应混合物中的DTT可显着提高切割效率,尤其是在较长时间的孵育期间
将重悬的产物储存在-20°C。 建议在100μL 水或 50% 甘油(v/v)中重悬酶,并补充 1 mM DTT。水/DTT中的溶液应以冷冻等分试样储存,以避免冻融循环,这会对蛋白酶活性产生不利影响。
SUMO蛋白酶在很宽的温度范围(2-30°C),离子强度范围(0-400 mM NaCl)和pH 范围(6-8.5)内都有活性。然而,其活性可能因底物和条件而变化。研究人员需要优化其特定的反应条件。作为初步建议,每 mg 靶蛋白可以使用20 单位的SUMO蛋白酶,在30℃ 下,1 小时,或在2-8℃ 下过夜。然后可以通过 SDS-PAGE 估计切割效率。如果需要,然后可以调整 SUMO蛋白酶的量。SUMO蛋白酶在还原剂存在下效果更好,例如0.5-2mM DTT。反应混合物中的DTT可显着提高切割效率,尤其是在较长时间的孵育期间
将重悬的产物储存在-20°C。 建议在100μL 水或 50% 甘油(v/v)中重悬酶,并补充 1 mM DTT。水/DTT中的溶液应以冷冻等分试样储存,以避免冻融循环,这会对蛋白酶活性产生不利影响。
單位定義
在30℃ 下,一单位酶可在1小时内,切割 90%的100pmol SUMO-GST。
儲存類別代碼
11 - Combustible Solids
水污染物質分類(WGK)
WGK 2
閃點(°F)
Not applicable
閃點(°C)
Not applicable
iScience, 24(10), 103153-103153 (2021-10-15)
The dual function protein ACAD9 catalyzes α,β-dehydrogenation of fatty acyl-CoA thioesters in fatty acid β-oxidation and is an essential chaperone for mitochondrial respiratory complex I (CI) assembly. ACAD9, ECSIT, and NDUFAF1 interact to form the core mitochondrial CI assembly complex.
Journal for immunotherapy of cancer, 10(4) (2022-04-17)
Type 1 conventional dendritic cells (cDC1s) are characterized by their ability to induce potent CD8+ T cell responses. In efforts to generate novel vaccination strategies, notably against cancer, human cDC1s emerge as an ideal target to deliver antigens. cDC1s uniquely
eLife, 10 (2021-09-16)
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Cell, 181(6), 1380-1394 (2020-06-06)
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商品
Proteases for biotinylated tag removal for protein purification workflows with related reagents and technical resources.
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