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一般說明
ApopTag 过氧化物酶原位凋亡检测试剂盒通过TUNEL法标记和检测DNA链断裂来检测凋亡细胞。该试剂盒为40份样本的免疫过氧化物酶染色提供了充足的试剂。使用明场显微镜观察结果。
凋亡是细胞死亡的一种形式，可以消除受损或多余的细胞。它受多种信号传导和效应子途径控制，这些途径介导对外部生长，存活或死亡因素的主动反应。细胞周期检查点控制与凋亡酶级联有关，这些和其他联系的完整性在许多疾病（例如癌症）中可能会受到遗传损害。关于细胞凋亡的各个方面（例如7、11、19、24、39、42）和检测细胞凋亡的方法（例如10、32、36），有许多印刷书籍和数百篇最近的评论文章。
在细胞凋亡的所有方面，决定性的特征是细胞形态的完全变化。如通过电子显微镜观察到的，细胞经历收缩，染色质边缘化，膜起泡，核浓缩然后分割，并分裂成可能被吞噬的凋亡小体（11、19、24）。特征性凋亡小体寿命短且微小，当通过明场显微镜观察时可以类似于其他细胞成分。凋亡细胞中的DNA片段化之后是细胞死亡，并且通常在几个小时内（7）从组织中去除。在任何时候，只有2-3%的细胞出现明显的细胞凋亡，可能导致每天高达25%的组织消退率（6）。因此，仅通过形态学定量测量凋亡指数可能是困难的。
DNA片段化通常与凋亡中细胞形态的超微结构变化有关（26、38）。在许多经过充分研究的模型系统中，首先通过高阶染色质结构组织的内切核酸降解产生300 kb和50 kb的大片段。这些大的DNA片段在脉冲场电泳凝胶上可见（5、43、44）。在大多数模型中，依赖Ca2+和Mg2+的核酸内切酶活性的激活通过在核小体之间的接头位点切割DNA进一步缩短了片段（3）。最终的DNA片段是约180 bp核小体单位的多聚体。这些多聚体表现为从多种凋亡细胞（例如3、7、13、35、44）提取的DNA的标准琼脂糖电泳凝胶上看到的熟悉的“DNA阶梯”。
通过DNA片段化检查细胞凋亡的另一种方法是通过TUNEL测定法（13），这是ApopTag 技术的基础。采用修饰核苷酸酶促标记游离3′-OH端基，从而检测出DNA链断裂。DNA片段化产生的这些新的DNA末端通常位于形态可识别的细胞核和凋亡小体中。相反，正常或增殖细胞核的DNA 3′-OH末端数量相对较少，通常不会用试剂盒染色。ApopTag试剂盒可检测与细胞凋亡相关的单链（25）和双链断裂。除非将其与凋亡反应偶联，否则无法通过TUNEL分析鉴定药物诱导的DNA损伤（8）。此外，即使在细胞核发生重大形态变化之前，该技术也可以检测染色质凝结已经开始且链断裂较少的系统中的早期细胞凋亡（4、8）。
细胞凋亡与意外细胞死亡（坏死）不同。下表总结了区分凋亡和坏死细胞死亡的许多形态和生化差异（经参考文献39许可改编）。
在细胞凋亡的所有方面，决定性的特征是细胞形态的完全变化。如通过电子显微镜观察到的，细胞经历收缩，染色质边缘化，膜起泡，核浓缩然后分割，并分裂成可能被吞噬的凋亡小体（11、19、24）。特征性凋亡小体寿命短且微小，当通过明场显微镜观察时可以类似于其他细胞成分。凋亡细胞中的DNA片段化之后是细胞死亡，并且通常在几个小时内（7）从组织中去除。在任何时候，只有2-3%的细胞出现明显的细胞凋亡，可能导致每天高达25%的组织消退率（6）。因此，仅通过形态学定量测量凋亡指数可能是困难的。
DNA片段化通常与凋亡中细胞形态的超微结构变化有关（26、38）。在许多经过充分研究的模型系统中，首先通过高阶染色质结构组织的内切核酸降解产生300 kb和50 kb的大片段。这些大的DNA片段在脉冲场电泳凝胶上可见（5、43、44）。在大多数模型中，依赖Ca2+和Mg2+的核酸内切酶活性的激活通过在核小体之间的接头位点切割DNA进一步缩短了片段（3）。最终的DNA片段是约180 bp核小体单位的多聚体。这些多聚体表现为从多种凋亡细胞（例如3、7、13、35、44）提取的DNA的标准琼脂糖电泳凝胶上看到的熟悉的“DNA阶梯”。
通过DNA片段化检查细胞凋亡的另一种方法是通过TUNEL测定法（13），这是ApopTag 技术的基础。采用修饰核苷酸酶促标记游离3′-OH端基，从而检测出DNA链断裂。DNA片段化产生的这些新的DNA末端通常位于形态可识别的细胞核和凋亡小体中。相反，正常或增殖细胞核的DNA 3′-OH末端数量相对较少，通常不会用试剂盒染色。ApopTag试剂盒可检测与细胞凋亡相关的单链（25）和双链断裂。除非将其与凋亡反应偶联，否则无法通过TUNEL分析鉴定药物诱导的DNA损伤（8）。此外，即使在细胞核发生重大形态变化之前，该技术也可以检测染色质凝结已经开始且链断裂较少的系统中的早期细胞凋亡（4、8）。
细胞凋亡与意外细胞死亡（坏死）不同。下表总结了区分凋亡和坏死细胞死亡的许多形态和生化差异（经参考文献39许可改编）。
成分
平衡缓冲液：3.0 mL -15°C至-25°C
反应缓冲液 2.0 mL -15°C至-25°C
TdT酶 0.64 mL -15°C至-25°C
终止/洗涤缓冲液 20 mL -15°C至-25°C
抗地高辛-过氧化物酶* 3.0 mL 2°C至8°C
塑料盖玻片 100 ea.室温
注释：需要单独购买DAB（过氧化物酶底物）。该试剂盒不随附。
每个试剂盒的样品数量：当根据说明使用时，提供足够的材料对40个约5 mm2的组织标本进行染色。当试剂盒用于载玻片标本时，反应缓冲液将在其他试剂之前完全消耗。
反应缓冲液 2.0 mL -15°C至-25°C
TdT酶 0.64 mL -15°C至-25°C
终止/洗涤缓冲液 20 mL -15°C至-25°C
抗地高辛-过氧化物酶* 3.0 mL 2°C至8°C
塑料盖玻片 100 ea.室温
注释：需要单独购买DAB（过氧化物酶底物）。该试剂盒不随附。
每个试剂盒的样品数量：当根据说明使用时，提供足够的材料对40个约5 mm2的组织标本进行染色。当试剂盒用于载玻片标本时，反应缓冲液将在其他试剂之前完全消耗。
儲存和穩定性
将试剂盒储存在-15°C至-25°C下，直至首次使用。首次使用后，如果试剂盒将在三个月内使用，则将TdT酶（90418）储存在-15°C至-25°C，其余组分储存在2°C至8°C。
注意事项
以下试剂盒组件包含二甲胂酸钾（二甲基胂酸）作为缓冲液：平衡缓冲液（90416），反应缓冲液（90417）和TdT酶（90418）。如果吞食，这些成分是有害的；避免接触皮肤和眼睛（戴上手套，眼镜），并立即清洗接触区域。
2.抗体偶联物（90420）和封闭液（#10和#13）含有0.08%叠氮化钠作为防腐剂。
3.TdT酶（90418）含有甘油，在-20°C时不会结冰。对于最长有效期，请勿将该试剂在分装前加热至室温。
注意事项
以下试剂盒组件包含二甲胂酸钾（二甲基胂酸）作为缓冲液：平衡缓冲液（90416），反应缓冲液（90417）和TdT酶（90418）。如果吞食，这些成分是有害的；避免接触皮肤和眼睛（戴上手套，眼镜），并立即清洗接触区域。
2.抗体偶联物（90420）和封闭液（#10和#13）含有0.08%叠氮化钠作为防腐剂。
3.TdT酶（90418）含有甘油，在-20°C时不会结冰。对于最长有效期，请勿将该试剂在分装前加热至室温。
法律資訊
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
訊號詞
Danger
危險分類
Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B - Skin Sens. 1 - STOT RE 2 Inhalation
標靶器官
Respiratory Tract
儲存類別代碼
6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects
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Cellular apoptosis assays to detect programmed cell death using Annexin V, Caspase and TUNEL DNA fragmentation assays.
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