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MABS1330

Sigma-Aldrich

抗-N1-磷酸组氨酸(1-pHis)抗体,克隆SC1-1

clone SC1-1, from rabbit

别名:

N1-Phosphohistidine

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About This Item

分類程式碼代碼:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41

生物源

rabbit

品質等級

抗體表格

purified antibody

抗體產品種類

primary antibodies

無性繁殖

SC1-1, monoclonal

物種活性

E. coli, human

物種活性(以同源性預測)

all

技術

affinity chromatography: suitable
dot blot: suitable
immunocytochemistry: suitable
western blot: suitable

同型

IgG

運輸包裝

wet ice

目標翻譯後修改

phosphorylation (N1-pHis)

一般說明

磷酸化在调节蛋白质活性和细胞中各种细胞信号事件中起重要作用。受磷酸组氨酸(pHis)检测工具的限制,大多数研究集中在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸磷酸化上。组氨酸磷酸化可发生在咪唑环的N1(1-pHis)或N3(3-pHis)处。含有1-pHis和3-pHis的稳定的磷酸化三唑基丙氨酸类似物(1-pTza和3-pTza)的肽的开发允许产生用于研究信号事件中组氨酸N1和N3磷酸化的抗体。越来越多的证据表明His激酶与癌症和肿瘤转移有关,第一个鉴定出的转移抑制基因是两种已知的哺乳动物His激酶Nm23-H1(也称为NME1、嘧啶核苷二磷酸激酶或NDPK-A)之一。Nm23-H1/Nme1和密切相关的Nm23-H2(Nme2/NDPK-B)通过1-pHis酶中间体催化磷酸盐从ATP转移到核苷二磷酸(NDP)上。Nm23-H1/-H2也具有His激酶活性,可将磷酸盐从活性位点pHis转移到目标蛋白中的His上。诸如磷酸甘油酸变位酶(PGAM)、琥珀酰辅酶A合酶(SCS)和ATP柠檬酸裂合酶(ACL)之类的代谢酶也使用pHis作为酶中间体。与NME1/2不同,PGAM使用3-pHis作为酶中间体。除真核生物外,组氨酸磷酸化在趋化性涉及的细菌“两组分”信号传导途径中也有充分的文献记载,尽管磷酸盐从受体/传感器蛋白中形成的pHis转移到受体反应调节蛋白的Asp残基上,并且受体/传感器蛋白本质上起天冬氨酸激酶的作用。

特異性

目标修饰不是物种特异性的。
选择性检测具有咪唑环N1磷酸化组氨酸(1-pHis)而非3-pHis的蛋白。

免疫原

含有不可水解的磷酸组氨酸类似物1-pTza的随机肽的KLH偶联文库。
表位:N1-磷酸组氨酸(1-pHis)

應用

抗N1-磷酸组氨酸(1-pHis)抗体,克隆SC1-1是一种异构体特异性单克隆抗体,可特异性检测N1位点磷酸化的组氨酸。该纯化的mAb得到已发布数据的支持,该数据证明了在蛋白质印迹、免疫荧光&免疫亲和纯化中的性能。
斑点印迹分析:一个代表性批次在His118上检测到重组人NM23-H1/NME1的体外自磷酸化,以及含有1-pTza而非3-pTza磷酸组氨酸类似物的肽。克隆SC1-1对基于NM23-H1/NME1 1-pHis118序列的1-pTza肽反应性最高,对基于组蛋白H4 1-pHis18或ACLY 1-pHis760序列的肽反应性较低,对基于GNB1 1-pHis266的反应性最低或基于Kca3.1 1-pHis358的序列,对磷酸化酪氨酸不反应(Fuhs, S.R.,et al.(2015).Cell.162(1):198-210)。
蛋白质印迹分析:一个代表性批次在多个细胞裂解物中检测到热敏组氨酸N1-磷酸化(1-pHis)(Fuhs,S.R.,et al.(2015).Cell.162(1):198-210)。
免疫细胞化学分析:一个代表性批次通过荧光免疫细胞化学在4%多聚甲醛固定的HeLa细胞和鼠骨髓来源的巨噬细胞中检测到N1-磷酸组氨酸(1-pHis)的免疫反应性不同于3-pHis的免疫反应性。在酸性区室周围的区域中发现了1-pHis免疫反应性,但在这些区室或细胞核内未发现(Fuhs,S.R.,et al.(2015).Cell.162(1):198-210)。
免疫亲和纯化:在LC-MS/MS分析之前,将一个代表性批次交联至蛋白A树脂,用于从细胞裂解物中免疫亲和纯化1-pHis蛋白(Fuhs,S.R.,et al.(2015).Cell.162(1):198-210)。
注意:在检测磷酸组氨酸之前,请勿加热样品。组氨酸磷酸化对热和酸不稳定。为生成特异性试验的阴性对照,可将等分样品在95ºC下加热10-15分钟,以逆转组氨酸磷酸化。或者,可以将等分试样样品在酸化pH值和37ºC下孵育15分钟,以减少组氨酸的磷酸化。孵育前用25 µL 1 M HCl酸化各100 µL样品,然后在磷酸组氨酸检测前用25 µL 1 M NaOH中和。

品質

通过蛋白质印迹法评估NME1自磷酸化反应。

蛋白质印迹分析:0.3 µg/mL该抗体在5 µg等份自磷酸化反应中检测到带有N1-磷酸组氨酸(1-pHis)的重组人NME1(NM23-H1)。

標靶描述

根据组氨酸磷酸化蛋白而变化。

外觀

形式:纯化

其他說明

浓度:请参考特定批次的数据表。

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儲存類別代碼

12 - Non Combustible Liquids

水污染物質分類(WGK)

WGK 1

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