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17-625

Sigma-Aldrich

ChIPAb+三甲基组蛋白H3(Lys9) - ChIP免疫沉淀验证抗体和引物试剂套装

from rabbit

别名:

H3K9me3, Histone H3 (tri methyl K9), Histone H3K9me3

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About This Item

分類程式碼代碼:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.41

生物源

rabbit

品質等級

無性繁殖

polyclonal

物種活性

human, mouse, vertebrates

製造商/商標名

ChIPAb+
Upstate®

技術

ChIP: suitable
dot blot: suitable
western blot: suitable

NCBI登錄號

UniProt登錄號

運輸包裝

dry ice

基因資訊

human ... H3F3B(3021)

相关类别

一般說明

对每批、每次的全部ChIPAb+抗体的染色质沉淀进行单独验证。每个ChIPAb+抗体组均包含对照引物(通过qPCR对每个批次进行检测),以在基因座特异性环境下对IP结果进行生物学验证。提供了qPCR方案和引物序列,使研究人员能够在染色质环境中使用我们的抗体时验证ChIP方案。每组还包括阴性对照抗体,以确保ChIP反应的特异性。
ChIPAb+三甲基组蛋白H3(Lys9)套装包含抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体、阴性对照抗体(纯化兔IgG)、qPCR引物(用于扩增人ZNF554基因3’端的117bp区域)。三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体和阴性对照抗体的规格与ChIP反应次数成比例,可用于功能性验证三甲基组蛋白H3(Lys9)相关染色质的免疫沉淀。
组蛋白的甲基化可以发生在两个不同的残基上:精氨酸或赖氨酸。组蛋白甲基化可以与转录激活或抑制相关,具体取决于甲基化残基。组蛋白H3的赖氨酸9可以通过不同的组蛋白甲基转移酶(HMTs)(例如,SuvH39H1或G9a)单甲基化、二甲基化或三甲基化。该甲基化的赖氨酸可以通过组蛋白脱甲基酶(如JMJD1A,LSD1或JMJD2C)脱甲基。该残基的甲基化主要与转录抑制有关。

特異性

识别赖氨酸9三甲基化的组蛋白H3,分子量(Mr) 17 kDa。
该免疫原序列在广泛的动植物物种中是相同的,因此预期有广泛的交叉反应性。。

免疫原

三甲基组蛋白H3 (Lys9)抗体由含有序列…AR[me3K]S…的BSA标记合成肽免疫制备,其中me3K对应人组蛋白H3的三甲基赖氨酸9。

應用

三甲基组蛋白H3(Lys9)ChIP验证抗体&引物套装,包括ChIP级抗体&PCR特异性对照引物,用于H3K9Me3的染色质免疫沉淀。
染色质免疫沉淀:
采用4 μg的纯化抗体或正常兔IgG和Magna ChIP A试剂盒(货号17-610),对来自2x106个HeLa细胞的、超声制备的染色质进行染色质免疫沉淀。
使用针对人GAPDH启动子的ChIP引物和针对人MyoD启动子的引物,经qPCR鉴定三甲基组蛋白H3(Lys9)相关DNA片段,验证免疫沉淀成功。
详细实验方案请参阅 EZ-Magna ChIP A(货号17-408)或EZ-ChIP(货号17-371)试剂盒使用方法。

蛋白质印迹分析:
电泳分离重组组蛋白H3(泳道1)和HeLa细胞酸提取物(泳道2),转移至硝酸纤维素膜,用抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体(1 μg/mL)检测。通过HRP标记山羊抗兔二抗和化学发光检测系统对蛋白显色(如图)。

Beadlyte组蛋白-肽特异性试验:
将0.5 μg/ml纯化抗二甲基组蛋白H3(Lys9)与具有下列修饰的组蛋白H3肽标记的微珠混合物共同孵育:
1. 三甲基-赖氨酸9
2. 二甲基-赖氨酸9
3. 单甲基-赖氨酸9
4.无修饰H3
过滤去除未结合抗体。将肽-抗体复合物与PE标记的抗兔二抗共同孵育。在Luminex 100仪器上读取荧光。绘制了中值荧光强度(MFI)。

成分

抗三甲基组蛋白H3(Lys9)多克隆抗体,1瓶

ZNF554引物对,1瓶

品質

染色质免疫沉淀:
采用4 µg正常兔IgG或抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体和Magna ChIP A试剂盒(目录号17-610),对从3x106 NIH3T3 L1细胞超声制备的染色质进行染色质免疫沉淀。 使用ChIP引物ZNF554通过qPCR验证了三甲基组蛋白H3(Lys9)相关DNA片段的成功免疫沉淀(请参见图)。
有关实验详细信息,请参阅EZ-Magna A ChIP(目录号17-408)或EZ-ChIP(目录号17-371)方案。

標靶描述

17kDa

外觀

形式:纯化
抗三甲基组蛋白H3(Lys9)抗体(兔多克隆IgG)。1小瓶,包含100 μg蛋白A纯化IgG,溶于100 μL 0.02 M磷酸盐缓冲液(pH 7.4)、0.25 M NaCl、0.05%叠氮化钠和30%甘油。 储存于-20°C。

正常兔IgG。1小瓶,包含125 μg正常兔IgG,溶于125 μL储存液(含0.1%叠氮化钠)。储存于-20°C。

ChIP引物,ZNF554。1小瓶,包含75 μL ZNF554基因特定引物各5 μM。在-20°C下储存。
正向:CGG GGA AAA GCC CTA TAA AT
反向:TCC ACA TTC ACT GCA TTC GT

分析報告

对照
包括阴性对照兔IgG抗体和对ZNF554特异性的对照引物。

法律資訊

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

儲存類別代碼

10 - Combustible liquids


分析证书(COA)

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Dicer independent small RNAs associate with telomeric heterochromatin.
Cao, F; Li, X; Hiew, S; Brady, H; Liu, Y; Dou, Y
RNA null
Ping K Chan et al.
Human molecular genetics, 22(13), 2662-2675 (2013-03-12)
Large intronic expansions of the triplet-repeat sequence (GAA.TTC) cause transcriptional repression of the Frataxin gene (FXN) leading to Friedreich's ataxia (FRDA). We previously found that GAA-triplet expansions stimulate heterochromatinization in vivo in transgenic mice. We report here using chromosome conformation
Polycomb repressive complex 2 regulates normal hematopoietic stem cell function in a developmental-stage-specific manner.
Xie, H; Xu, J; Hsu, JH; Nguyen, M; Fujiwara, Y; Peng, C; Orkin, SH
Cell Stem Cell null
Youhua Tan et al.
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Tumor-repopulating cells (TRCs) are a tumorigenic sub-population of cancer cells that drives tumorigenesis. We have recently reported that soft fibrin matrices maintain TRC growth by promoting histone 3 lysine 9 (H3K9) demethylation and Sox2 expression and that Cdc42 expression influences
A Maya-Mendoza et al.
Cell death & disease, 5, e1351-e1351 (2014-07-25)
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