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A dual component heme biosensor that integrates heme transport and synthesis in bacteria.

Journal of microbiological methods (2015-08-09)
Christopher L Nobles, Justin R Clark, Sabrina I Green, Anthony W Maresso
RESUMEN

Bacterial pathogens acquire host iron to power cellular processes and replication. Heme, an iron-containing cofactor bound to hemoglobin, is scavenged by bacterial proteins to attain iron. Methods to measure intracellular heme are laborious, involve complex chemistry, or require radioactivity. Such drawbacks limit the study of the mechanistic steps of heme transport and breakdown. Hypothesizing heme homeostasis could be measured with fluorescent methods, we coupled the conversion of heme to biliverdin IXα (a product of heme catabolism) by heme oxygenase 1 (HO1) with the production of near-infrared light upon binding this verdin by infrared fluorescent protein (IFP1.4). The resultant heme sensor, IFP-HO1, was fluorescent in pathogenic E. coli exposed to heme but not in the absence of the heme transporter ChuA and membrane coupling protein TonB, thereby validating their long-standing proposed role in heme uptake. Fluorescence was abolished in a strain lacking hemE, the central gene in the heme biosynthetic pathway, but stimulated by iron, signifying the sensor reports on intracellular heme production. Finally, an invasive strain of E. coli harboring the sensor was fluorescent during an active infection. This work will allow researchers to expand the molecular toolbox used to study heme and iron acquisition in culture and during infection.

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Sigma-Aldrich
Seroalbúmina bovina, heat shock fraction, protease free, fatty acid free, essentially globulin free, pH 7, ≥98%
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Seroalbúmina bovina, lyophilized powder, ≥96% (agarose gel electrophoresis)
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Seroalbúmina bovina solution, 30% in DPBS, sterile-filtered, BioXtra, suitable for cell culture
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Seroalbúmina bovina, lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture
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Seroalbúmina bovina, fatty acid free, low endotoxin, lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture, ≥96% (agarose gel electrophoresis)
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Seroalbúmina bovina, heat shock fraction, protease free, essentially globulin free, pH 7, ≥98%
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Seroalbúmina bovina, heat shock fraction, protease free, pH 7, ≥98%
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Seroalbúmina bovina, cold ethanol fraction, pH 5.2, ≥96%
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Seroalbúmina bovina, lyophilized powder, essentially fatty acid free, ≥96% (agarose gel electrophoresis)
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L-Glutatión reducido, suitable for cell culture, BioReagent, ≥98.0%, powder
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Seroalbúmina bovina, heat shock fraction, pH 5.2, ≥96%
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Seroalbúmina bovina, heat shock fraction, suitable for RIA, pH 5.2, ≥96%
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Seroalbúmina bovina, heat shock fraction, lyophilized powder, essentially fatty acid free, ≥98% (agarose gel electrophoresis)
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Protein standard, liquid, 2 mg protein/ml
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Ampicillin, anhydrous, 96.0-102.0% (anhydrous basis)
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Deferoxamine mesylate salt, powder, ≥92.5% (TLC)
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Seroalbúmina bovina solution, 20 mg/mL in H2O, low bioburden, protease free, for molecular biology
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Seroalbúmina bovina, lyophilized powder, crystallized, ≥98.0% (GE)
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Seroalbúmina bovina, lyophilized powder, essentially globulin free, ≥99% (agarose gel electrophoresis)
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Seroalbúmina bovina, lyophilized powder, low endotoxin, BioReagent, suitable for cell culture, ≥98% (agarose gel electrophoresis)
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Seroalbúmina bovina, lyophilized powder, suitable for (for molecular biology), Non-acetylated
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Seroalbúmina bovina, powder, BioXtra
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Seroalbúmina bovina, heat shock fraction, protease free, suitable for hybridization, pH 7, ≥98%
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Diisopropylfluorophosphate
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Isopropyl β-D-thiogalactopyranoside solution, ReadyMade IPTG solution for Blue-white screening
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Biliverdin hydrochloride, ≥97.0% (TLC)
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L-Glutatión reducido, ≥98.0%
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2,2′-Bipyridyl, ReagentPlus®, ≥99%
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Seroalbúmina bovina, heat shock fraction, pH 7, ≥98%
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IPTG, ≥99% (TLC), ≤0.1% Dioxane
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