Nucleasas (ADNasas y ARNasas)

Endonucleasas de restricción

Nucleasas para la digestión de ADN y ARN

Nuestras nucleasas varían en función de la especificidad de rotura, así como de propiedades como el pH óptimo, lo que permite al investigador elegir la enzima digestiva más adecuada a los requisitos experimentales. La desoxirribonucleasa I procedente de mamíferos, por ejemplo, da lugar a productos con P1 5’ terminal de Penicillium citrinum; degrada el ADN y el ARN monocatenarios, pero no el ADN bicatenario. La ribonucleasa A hidrolizará cualquier ARN que contamine muestras proteicas o preparaciones de ADN plasmídico. Muchas de estas enzimas tienen usos añadidos en biología molecular. Por ejemplo, la ADNasa I “mella” el ADN para permitir la incorporación de bases marcadas. La ARNasa A es una herramienta en el ensayo de protección de la ARNasa que mide la abundancia de ARNm específicos.

Enzimas ADNasas desoxirribonucleasa I y desoxirribonucleasa II

La desoxirribonucleasa I cataliza la escisión endonucleolítica del ADN bicatenario y monocatenario para producir 5'-fosfodinucleótidos y 5'-fosfooligonucleótidos como productos finales. El producto de la hidrólisis es una mezcla compleja de mononucleótidos y oligonucleótidos 5'-fosfato. En presencia de iones magnesio, la ADNasa I ataca a cada hebra de ADN independientemente y los sitios de rotura son aleatorios. En presencia de manganeso (II), la ADNasa I rompe las dos cadenas de ADN aproximadamente en el mismo sitio. En la mayoría de los protocolos se utiliza el ion magnesio con la ADNasa I, pero para fines específicos se utiliza el manganeso. Además, la desoxirribonucleasa II cataliza la escisión endonucleolítica del ADN bicatenario y monocatenario para producir nucleósidos 3'-fosfatos y 3'-fosfooligonucleótidos como productos finales. El intervalo de pH de actividad es de 4,0 a 6,5, con una actividad de sólo un 15 % aproximadamente a pH 6,5, y un un pH óptimo de 5,0. La estabilidad óptima de la enzima se observa a pH 5 - 5,5, con una inactivación rápida a pH 8,5 y 30 °C. Ofrecemos una amplia colección de enzimas ADNasa para trabajar con una variedad de tipos de muestra y aplicaciones. Ya sea liofilizadas o en forma líquida, algunas de nuestras ADNasas incluyen concentraciones significativamente bajas de ARNasas o proteasas para proteger su muestra de una digestión no deseada.

ARNasas ribonucleasa A, ribonucleasa H y ribonucleasa T₁

La ribonucleasa A cataliza la escisión endonucleolítica del ARN para producir nucleósidos 3'-fosfatos y 3'-fosfooligonucleótidos terminados en Cp o Up. Entre los activadores de la ARNasa A se cuentan las sales de potasio y de sodio. Su temperatura óptima de actividad es de 60 °C, aunque la enzima muestra actividad a partir de 15-70 °C. El pH óptimo es 7,6, con un intervalo de actividad de 6-10. La mayor actividad la exhibe con ARN monocatenario. La ARNasa A es una enzima muy estable que puede soportar temperaturas de hasta 100 °C. A 100 °C, la ARNasa A es más estable entre los pH 2,0 y 4,5. La ribonucleasa H hidroliza específicamente los enlaces fosfodiéster del ARN en los dúplex ARN:ADN para generar productos con extremos 3'-hidroxilo y 5'-fosfato. Degrada sólo el componente ARN del híbrido ADN-ARN (el ARN que está unido por enlaces de hidrógeno a una cadena de ADN complementaria).

Además, la ribonucleasa T₁ cataliza la escisión endonucleolítica en dos etapas del ARN para producir nucleósidos 3'-fosfatos y 3'-fosfooligonucleótidos terminados principalmente en Gp. En la reacción, la rotura ocurre entre el grupo 3'-fosfato de un ribonucleótido de guanidina y el 5'-hidroxilo del nucleótido adyacente. El producto inicial es un nucleósido 2',3'-fosfato cíclico que se hidroliza al correspondiente nucleósido 3' fosfato. En disolución, es resistente al calor (100 °C durante 10 minutos a pH 6) y al ácido, pero inestable en disolución alcalina (>pH 9). Debe tenerse en cuenta que la reacción catalizada por la enzima no puede detenerse calentando la mezcla de reacción a 100 °C. Ofrecemos una amplia colección de enzimas ARNasa para propiciar la variedad de tipos de muestras y aplicaciones. Ya sea liofilizadas o en forma líquida, algunas de nuestras ARNasas incluyen concentraciones significativamente bajas de proteasas para proteger su muestra de una escisión proteica no deseada.